의 DNA 조각의 분리를위한 아가로 오스 젤 전기 영동

아가로 오스 겔 전기 영동은 100 BP의 25킬로바이트 ^1에 이르는 다양한 크기의 DNA 조각을 분리하는 가장 효과적인 방법입니다. 아가로 오스는 해초 장군 Gelidium 및 Gracilaria으로부터 격리하고, 반복 agarobiose (L-및 D-갈락토 오스) ^subunits이 구성되어 있습니다. 겔화 동안 아가로 오스의 폴리머가 아닌 covalently 연결 및 기공 크기 겔의 분자 체질 속성을 결정하는 번들의 네트워크를 형성합니다. 아가로 오스 겔 전기 영동의 사용은 DNA의 분리를 혁명. 아가로 오스 젤의 채택 이전에 DNA가 주로에만 크기의 근사치를 제공 자당 밀도 구배 원심 분리를 사용하여 분리되었다. 아가로 오스 겔 전기 영동을 사용하여 DNA를 분리하기 위해 DNA가 젤과 현재 응용의 프리 캐스트 우물에로드됩니다. DNA를 (그리고 RNA) 분자의 인산 백본은 부정적인 전기장에 배치하면 따라서 부과되는 유전자 조각 p로 마이 그 레이션됩니다ositively 양극 부과. DNA가 균일한 질량 / 전하 비를 가지고 있기 때문에, DNA 분자가 여행한 거리는 분자량 ³ 로그에 반비례한다는 그러한 패턴에 아가로 오스 겔 내에서 크기로 구분됩니다. 아가로 오스 겔을 통해 DNA의 움직임을 위해 선도적인 모델은 최첨단 앞으로 이동과 ^4를 따라 분자의 나머지를 가져옵니다 의하여 "reptation을 편견"입니다. 2) 아가로 오스 농도, 3) DNA의 형태 ^5; 4) ethidium 브로마이드 6의 전압을 적용, 5)의 존재) 종류의 DNA 분자의 1) 크기 : 겔을 통해 DNA 분자의 마이 그 레이션 율에 따라 결정됩니다 아가로 오스와 7) 전기 영동 버퍼의. 분리 후의 DNA 분자는 적당한 색소를 더럽히는 것 후에는 자외선 아래에서 시각 될 수 있습니다. 이 프로토콜에 따라, 학생들은 수 있어야합니다 :

1. 디엔에이 조각 겔 매트릭스 내에 구분하는 메커니즘을 이해
2. 의 형태 방법을 이해DNA 분자는 겔 매트릭스를 통해 이동성을 결정합니다
3. 그들의 요구에 적절한 농도의 아가로 오스 솔루션을 식별
4. DNA 샘플의 전기 영동을위한 아가로 오스 겔 준비
5. 겔 전기 영동 장치 및 전원 공급 장치를 설정
6. 의 DNA 조각의 분리에 적합한 전압을 선택
7. ethidium의 브로마이드가 DNA 밴드의 시각화을 허용하는 메커니즘을 이해
8. 분리된 DNA 조각의 크기를 결정