检测蛋白质棕榈酰化培养海马神经元通过免疫沉淀和酰基-生物素交易所（ABE）

棕榈酰化是转译后的脂质变形例涉及的附件通过不稳定的硫酯键的底物蛋白质的半胱氨酸残基的16 -碳饱和脂肪酸，棕榈酸^，[1]评论中。棕榈酰化的基板蛋白增加其疏水性，通常有利于其贩运朝向细胞膜。最近的研究表明棕榈是最常见的脂质修改，神经元^1，2，，棕榈营业额是一个重要的机制，这些细胞的蛋白质调控的针对性和贩运。因此，更好地识别和检测的棕榈酰化基体的我们的理解贩卖的蛋白质在神经元。

蛋白质棕榈酰化在过去已检测技术上的阻碍，由于缺乏底物蛋白序列之间的共识，并依赖代谢labeling的棕榈酰蛋白与^{3 H-}棕榈酸酯，一个耗时的生化检测灵敏度低。酰基-生物素交易所（ABE）检测使开发更快速和高灵敏度检测的棕榈酰化蛋白质^2-4，是最优的，用于测量对神经元的蛋白质，棕榈酸的动态营业额。的ABE测定是由三种生化状态的步骤（ 图1）：1）不可逆封锁未修改的半胱氨酸的硫醇基团的使用N-ethylmaliemide（NEM），2）的特异性裂解和去掩蔽的棕榈酰化的半胱氨酸的硫醇基羟胺（HAM），和3）选择性标记的棕榈酰化的半胱氨酸，使用巯基反应的生物素化试剂，生物素-BMCC。 ABE步骤巯基的生物素化蛋白的纯化不同，这取决于实验的总体目标。

在这里，我们描述了一种方法，棕榈酰化蛋白的纯化主要海马由初始免疫沉淀法（IP）的步骤中使用的蛋白质，随后由ABE法和免疫印迹，以直接测量棕榈酰化，蛋白质的水平，这被称为IP-ABE检测抗体，该抗体针对的人神经元。低密度培养的胚胎大鼠海马神经元已被广泛用于研究的神经元蛋白的定位，功能和贩运，因此非常适合使用IP-ABE分析，为研究神经元蛋白棕榈酰化。的IP-ABE检测主要是要求标准的IP和蛋白质印迹试剂，并且仅受限于目标衬底的可用性抗。此法可以很容易地适用于在异源细胞培养，主要来自不同的小鼠和大鼠脑组织神经细胞，甚至是主要的脑组织本身的转棕榈酰化蛋白的纯化和检测。