Protein Transfectie van Mouse Lung

Verhogend eiwit expressie kunnen onderzoekers beter inzicht in de functionele rol van dat eiwit in het reguleren van de belangrijkste biologische processen ^1. In de longen, dit is doorgaans bereikt door middel van genetische benaderingen transgene muizen ^2,3 of virale of niet-virale vectoren die eiwitniveaus verhogen via verhoogde genexpressie ⁴ gebruiken. Transgene muizen zijn duur en tijdrovend te genereren en de willekeurige insertie van een transgen of chronische genexpressie kan normale longontwikkeling veranderen en hun uit bruikbaarheid van het model ^5. Terwijl voorwaardelijke transgenen afwenden problemen met chronische genexpressie ^6, omgekeerde tetracycline-gecontroleerde transactivator (rtTA) muizen, die worden gebruikt om voorwaardelijke expressie genereren, ontwikkelen spontaan luchtruim uitbreiding ^7. Zoals bij transgene, het gebruik van virale en niet-virale vectoren is duur en ⁸ kunnen veroorzaken dosis-dependent ontstekingsreacties die beschamen resultaten ⁹ en expressie ¹⁰ belemmeren. Bovendien is de werkzaamheid van herhaalde doses worden beperkt door versterkte immuunreacties op de vector ^11,12. Onderzoekers ontwikkelen adeno-geassocieerde virale (AAV) vectoren die minder ontstekingen veroorzaken en hebben meer expressie in de longen ^13.

Gebruik β-galactosidase, presenteren we een werkwijze voor het snel en effectief verhogen eiwitexpressie in de longen via een directe eiwit transfectietechniek. Dit protocol combineert een vaste hoeveelheid gezuiverd eiwit met 20 ul van een lipide-gebaseerde transfectie reagens (Pro-Ject, Pierce Bio) te laten binnendringen in het longweefsel zelf. De liposomale eiwitmengsel wordt vervolgens geïnjecteerd in de longen van de muizen via de trachea met een microsprayer (Penn Century, Philadelphia, PA). De microsprayer genereert een fijne pluim van vloeibare aërosol in de longen. Met de techniekwe hebben aangetoond uniforme afzetting van het geïnjecteerde eiwit gedurende de luchtwegen en alveoli van muizen ^14. De lipide transfectie techniek maakt gebruik van een kleine hoeveelheid eiwit effect. Dit beperkt de ontstekingsreactie die anders door eiwitrijk administratie zou worden uitgelokt. Inderdaad, deze techniek gepubliceerde we dat we konden PP2A activiteit in de long significant te verhogen zonder de long lavage cellulariteit ^15. Long lavage cellulariteit genomen 24 uur na challenge was vergelijkbaar met de controles (27 ± 4 controle versus 31 ± 5 albumine getransfecteerde; N = 6 per groep). Bovendien verhoogt eiwitgehalte en zonder het long ontwikkelingsveranderingen of bouwkundige veranderingen die kunnen optreden in transgene modellen. Echter, de noodzaak voor herhaalde toedieningen deze techniek minder gunstig voor studies naar de effecten van langdurige toename in eiwitexpressie maken. Dit zou bijzonder true voor eiwitten met korte halfwaardetijden.