Transfection החלבון של ריאות מאוס

הגדלת ביטוי חלבון מאפשרת לחוקרים להבין טובים יותר את התפקיד הפונקציונלי של חלבון זה בויסות תהליכים ביולוגיים מרכזיים ^1. בסרטן הריאות, זה הושג בדרך כלל באמצעות גישות גנטיות המנצלות עכברים הטרנסגניים ^2,3 או וקטורים ויראליים או לא ויראלי שמעלים רמות חלבון דרך ביטוי גנים מוגבר ^4. עכברים מהונדסים הם יקרים וגוזלים זמן ליצירה וההחדרה של ביטוי transgene או כרוני גנטי האקראית יכולה לשנות את התפתחות ריאות נורמלית ובכך להגביל את התועלת של מודל ^5. בעוד transgenics המותנה למנוע בעיות הקשורות לביטוי כרוני גן ^6, את transactivator (rtTA) עכברי טטרציקלין שהשליטה ההפוכים, שמשמשים ליצירת ביטוי תנאי, לפתח הגדלת מרחב אווירי ספונטנית ^7. כמו עם transgenics, השימוש בוקטורים ויראליים ולא ויראלי הוא יקר ⁸ ויכול לעורר מינון-Dתגובות דלקתיות ependent הרודפות את התוצאות ⁹ ולעכב את הביטוי ^10. יתר על כן, היעילות של מינונים חוזרים ונשנים הן מוגבלת על ידי תגובה חיסונית משופרת לווקטור ^11,12. חוקרים מפתחים adeno הקשורים וקטורים (AAV) יראליות שיעוררו פחות דלקות ולהיות ביטוי ארוך יותר בתוך הריאות ^13.

באמצעות β-גלקטוזידאז, אנו מציגים שיטה לביטוי חלבון גדל במהירות וביעילות בתוך הריאות באמצעות טכניקת transfection חלבון ישירה. פרוטוקול זה מערבב כמות קבועה של חלבון מטוהר עם 20 μl של מגיב transfection מבוסס שומנים (Pro-JECT, פירס ביו) כדי לאפשר חדירה לתוך רקמת הריאה עצמה. תערובת חלבוני liposomal לאחר מכן הוזרקה לריאות של העכברים באמצעות קנה הנשימה באמצעות microsprayer (פן המאה, פילדלפיה, פנסילבניה). Microsprayer יוצר פלומה דקה של תרסיס נוזלי לאורך הריאות. באמצעות הטכניקהאנו הוכחנו בתצהיר אחיד של החלבון המוזרק לאורך כל דרכי הנשימה ואת alveoli של עכברים ^14. טכניקת transfection השומנים מאפשרת שימוש בכמות קטנה של חלבון כדי להשיג את האפקט. זה מגביל את התגובה הדלקתית שאחרת היה עוררה על ידי ממשל חלבון גבוה. ואכן, שימוש בטכניקה זו שפרסמנו כי הצלחנו להגדיל את הפעילות בPP2A הריאות באופן משמעותי מבלי להשפיע על ריאות תאיות שטיפת ^15. cellularity שטיפת הריאות נלקחו 24 שעות לאחר האתגר היה דומה לקבוצת ביקורת (27 ± 4 שליטה לעומת 31 ± 5 transfected אלבומין, n = 6 לכל קבוצה). יתר על כן, הוא מגביר את רמות חלבון ללא גרימת שינויים התפתחותיים ריאה או שינויים ארכיטקטוניים שיכול להתרחש במודלים מהונדסים. עם זאת, את הצורך בממשלים חוזרים ונשנים עלול להפוך טכניקה זו פחות נוחה למחקרים הבוחנים את ההשפעות של עלייה ארוכת טווח בביטוי חלבון. זה יהיה בעיקר Truדואר לחלבונים עם זמן מחצית חיים קצרים.