إعداد ورم مستضد محملة الخلايا الجذعية الناضجة لعلاج مناعي

بينما أثبتت الدراسات السريرية أن اللقاحات DC مستضد محملة آمنة والعلاج واعدة للأورام ^1، يبقى فعاليتها السريرية التي ستنشأ. الطريقة الموضحة أدناه، التي أعدت وفقا للإجراءات التصنيع الجيدة (GMP) المبادئ التوجيهية، هو تعظيم الاستفادة من طريقة إعداد فيفو السابقين الأكثر شيوعا لتوليد أعداد كبيرة من البلدان النامية للدراسات السريرية ^2.

لدينا وسيلة تستخدم TLR الاصطناعية 3 ناهض Polyinosinic-Polycytidylic ميثيل السيلولوز حمض بولي-L-يسين (بولي ICLC) لتحفيز البلدان النامية. أنشئت لدينا دراسة سابقة أن بولي ICLC هو أقوى التحفيز نضوج الفرد بالنسبة للبلدان النامية الإنسان وفقا لتقييم زيادة إفراز من CD83 CD86 و، تحريض انترلوكين 12 (IL-12)، عامل نخر الورم (TNF)، انترفيرون غاما الناجمة عن بروتين 10 (IP-10)، interleukmin 1 (IL-1)، والنوع الأول إنترفيرون (الإنترفيرون)، والحد الأدنى من انترلوكين 10 (IL-10) الإنتاج. يتم التمييز البلدان النامية من خلايا وحيدات النوى المجمدة الدم المحيطي (PBMCs) التي حصلت عليها فصادة الكريات البيض. يتم عزل PBMCs بواسطة الطرد المركزي المتدرج Ficoll والمجمدة في مأخوذة. في يوم 1، ويتم إذابة PBMCs ومطلي على قوارير زراعة الأنسجة لتحديد لحيدات التي تلتزم سطح البلاستيك بعد 1-2 ساعة الحضانة عند 37 درجة مئوية في نسيج الثقافة الحاضنة. بعد الحضانة، ويتم غسل الخلايا الليمفاوية قبالة ويتم تربيتها وحيدات ملتصقة لمدة 5 أيام في وجود انترلوكين 4 (IL-4) ومحببة عامل تحفيز مستعمرة البلاعم (GM-CSF) للتمييز إلى البلدان النامية غير ناضجة. في يوم 6، ونابض البلدان النامية غير ناضجة مع البطلينوس هيموسيانين (KLH) بروتين ثقب المفتاح التي هي بمثابة مراقبة لجودة اللقاح، وربما تعزيز المناعية للقاح ^3. يتم تحفيز البلدان النامية إلى أن تنضج، محملة مستضدات الببتيد، وحضنت بين عشية وضحاها. في يوم 7، يتم غسلها الخلايا، وجمدت في 1 مليلتر مأخوذة تحتوي على4-20 × 10 ⁶ خلايا باستخدام المجمد سعر للرقابة. يتم تنفيذ الكثير الإفراج اختبار للدفعات من البلدان النامية ويجب أن تستوفي الحد الأدنى من المواصفات قبل أن يتم حقنها في المرضى.