تقنيات بسيطة وفعالة لإعداد تعليق خلية الخصية

الخصيتين الثدييات هي الأجهزة المعقدة جدا التي تحتوي على أكثر من 30 أنواع مختلفة من الخلايا، بما في ذلك الخلايا الجسدية الخصية ومراحل مختلفة من الخلايا الجرثومية. هذا التباين هو العيب هامة تتعلق بدراسة أسس تكوين الحيوانات المنوية لدى الثدييات، كما هناك حاجة السكان الخلية نقية أو المخصب في مراحل معينة من تطور الحيوانات المنوية لمعظم التحليلات الجزيئية ^1.

استراتيجيات مختلفة مثل Staput ^2،3، تصويل الطرد المركزي ^1، والتدفق الخلوي (FC) ^4،5 وقد استخدمت للحصول على السكان الخلية الخصية المخصب أو تنقيته من أجل تمكين دراسات التعبير الجيني التفاضلي.

هو مطلوب منها أن الخلايا هي في تعليق لمعظم النهج تخصيب / تنقية. من الناحية المثالية، فإن تعليق خلية تكون ممثلة من النسيج الأصلي، لديها نسبة عالية من خلايا قابلة للحياة وقليلة multinucleates - التي تميل إلى تشكيل لللطبيعة المخلوي من ظهارة المنوية ^6،7 - وعدم وجود كتل الخلية ^1. وكانت تقارير سابقة يتضح أن الايقاف الخلية الخصية باستخدام أسلوب الميكانيكية حصريا على استعداد تجمعت أكثر سهولة من تلك trypsinized ^1. من ناحية أخرى، والعلاجات الأنزيمية مع RNAses و / أو الأنزيمات تفصيل مثل التربسين وكولاجيناز تؤدي إلى تدهور الجزيئات محددة، وهو غير مرغوب فيه لبعض التطبيقات المصب. وينبغي أن تكون عملية مثالية قصيرة قدر الإمكان وتتطلب الحد الأدنى من التلاعب، وذلك لتحقيق الحفاظ جيدة من الجزيئات ذات الأهمية مثل mRNAs و. البروتوكولات الحالية لإعداد تعليق خلية من الأنسجة الصلبة وعادة ما تكون تعتمد على المشغل تستغرق وقتا طويلا، إلى حد كبير، وربما تلف انتقائي بعض أنواع الخلايا ^1،8.

بروتوكول المعروضة هنا يجمع بين مزايا تصنيفها الميكانيكية استنساخه للغاية وجيزة للغاية مع أحدbsence العلاج الأنزيمية، مما أدى إلى تعليق خلية جيدة الجودة التي يمكن استخدامها لتحليل تدفق cytometric والفرز ^4، ودراسات التعبير الجيني خفية ^9.