Isolement et enregistrements Chaîne Kv en cardiomyocytes murins auriculaire et ventriculaire

Gènes codent KCNE pour une petite famille de sous-unités de canaux Kv auxiliaires qui forment des complexes avec des sous-unités hétéromériques Kv canal alpha de modifier leurs propriétés fonctionnelles. Des mutations dans les gènes KCNE ont été trouvés chez les patients souffrant d'arythmies cardiaques telles que le syndrome du QT long et / ou la fibrillation auriculaire. Cependant, la physiopathologie moléculaire précise qui mène à ces maladies reste insaisissable. Dans des études précédentes, les propriétés électrophysiologiques de la maladie provoquant des mutations dans ces gènes ont surtout été étudiée dans des systèmes d'expression hétérologues et nous ne pouvons pas être sûr si les effets rapportés peuvent être directement traduits en cardiomyocytes natifs. Dans notre laboratoire, nous utilisons donc une approche différente. Nous étudier directement les effets de la délétion du gène KCNE dans les cardiomyocytes isolés de souris knock-out par électrophysiologie cellulaire - une technique unique que nous décrivons dans ce numéro de la Revue des expériences visualisées. Les cœurs de geneticasouris KCNE lly modifiées sont rapidement excisé et monté sur un appareil de Langendorff par canulation aortique. Ca ^{2 +} libre dans le myocarde est lié par l'EGTA, et la dissociation des myocytes cardiaques est alors réalisée par perfusion rétrograde des artères coronaires avec un faible spécialisée Ca ^{2 +} tampon contenant de la collagénase. Atria, paroi libre du ventricule droit et le ventricule gauche peut alors être séparés par des techniques de microchirurgie. Le calcium est ensuite ajouté lentement vers les cardiomyocytes isolés dans une étape multiple comprenant procédure de lavage. Cardiomyocytes auriculaires et ventriculaires d'apparence saine sans contractions spontanées sont alors immédiatement soumis à des analyses électrophysiologiques par la technique de patch-clamp ou d'autres analyses biochimiques au cours des 6 premières heures qui suivent l'isolement.