Создание жидкого покрытые культуры поляризованный человека эпителия дыхательных путей Calu-3 ячейки по изучению клетки-хозяина в ответ на возбудителей инфекций дыхательных путей

Апикальной и базолатеральной поверхности эпителиальных клеток дыхательных путей продемонстрировать направленный ответ на воздействия болезнетворных микроорганизмов в естественных условиях. Таким образом, идеальный в пробирке моделей для изучения клеточных реакций на возбудителей инфекций дыхательных путей поляризуются, образуя апикальной и базальной поверхностей. Одной из таких моделей отличается нормальным человеческим бронхиальные эпителиальные клетки (NHBE). Тем не менее, эта система требует образцы легочной ткани, опыт выделения и культивирования эпителиальных клеток из тканей, и время для создания воздух-жидкость культуры.

Calu-3 клетки, полученные из человеческих бронхиальной аденокарциномы, являются альтернативной моделью для изучения реакции проксимального эпителия дыхательных путей клетки дыхательных оскорбление ^1, фармакологических соединений ^{2-6, 7-9} и бактериальных и вирусных патогенов, включая вирус гриппа, риновирусы и тяжелого острого респираторного синдрома - ассоциированный коронавирус ^10-14. Недавно Wэлектронной показал, что Calu-3 клетки чувствительны к респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) инфекцией в соответствии с NHBE ^15,16. Здесь мы подробно создание поляризованным, покрытые жидкой культуры (LCC) из Calu-3 клетки, ориентируясь на технические подробности выращивания и культивирования Calu-3 клетки, сохраняя клетки, культивированные в LCC, и мы представляем Способ выполнения респираторная вирусная инфекция поляризованного Calu-3 клетки.

Чтобы постоянно получать поляризованные Calu-3 LCC, Calu-3 клетки должны быть тщательно субкультивируют до культивирования в Transwell вставками. Calu-3 однослойные культуры должна оставаться ниже 90% слияния, должны быть субкультивируют менее 10 раз из замороженных акций, и должны регулярно снабжаться свежей среде. После культивировали в Transwells, Calu-3 LCC должны быть обработаны с осторожностью. Нерегулярные изменения средствах массовой информации и механические или физические нарушения клеточных слоев или пластин негативно сказаться поляризациинесколько часов или дней. Поляризация контролируется оценки транс-эпителиального электрического сопротивления (TEER) и проверяется путем оценки пассивного уравновешивания флуоресцеина натрия между апикальной и базолатеральной отсеков ^17,18. После TEER плато на уровне или выше 1000 Ω × см ^2, Calu-3 LCC готовы использовать для изучения клеточных реакций на возбудителей инфекций дыхательных путей.