Real-time Analyser af Retinol Transport af membranen Receptor af Plasma retinolbindingsprotein

Vitamin A er afgørende for vision og vækst / differentiering af næsten alle menneskelige organer. Plasma retinol-bindingsprotein (RBP) er princippet og specifik bærer af vitamin A i blodet. Her beskriver vi en optimeret teknik til at producere og oprense holo-RBP og to real-time overvågning teknikker til at studere transporten af ​​vitamin A ved høj affinitet RBP receptor STRA6. Den første teknik gør det muligt at fremstille en stor mængde af høj kvalitet holo-RBP (100%-fyldt med retinol) for vitamin A transport assays. Høj kvalitet RBP er afgørende for funktionelle assays, fordi fejlfoldede RBP udgivelser vitamin A let og bakteriel forurening i RBP forberedelse kan forårsage artefakter. Real-time overvågning teknikker som elektrofysiologi har gjort kritiske bidrag til studier af membran transport. Den RBP receptormedieret retinol transport er ikke blevet analyseret i realtid indtil for nylig. Den anden teknik er beskrevet her, er real-time analyse af STRA6-katalyseret retinol frigivelse eller læsning. Den tredje teknik er realtidsanalyse af STRA6-katalyseret retinol transport fra holo-RBP til cellulært retinol bindingsprotein I (CRBP-I). Disse teknikker giver høj følsomhed og opløsning i afslørende RBP receptors vitamin A optagelse mekanisme.