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Biology

Les analyses en temps réel des Transports rétinol par le récepteur membranaire de plasma Retinol Binding Protein

Published: January 28th, 2013

DOI:

10.3791/50169

1Department of Physiology, Jules Stein Eye Institute and Howard Hughes Medical Institute, University of California, Los Angeles

La vitamine A est essentielle pour la vision et l'. Croissance / différenciation de presque tous les organes de l'homme Plasma retinol binding protein (RBP) est le principe et le transporteur spécifique de vitamine A dans le sang. Nous décrivons ici une technique optimisée pour produire et purifier holo-RBP et deux techniques de surveillance en temps réel pour étudier le transport de la vitamine A par le récepteur de haute affinité RBP STRA6. La première technique permet de produire une grande quantité de haute qualité holo-RBP (100%-chargé avec rétinol) pour la vitamine A des dosages de transport. RBP haute qualité est essentielle pour les tests fonctionnels, car mal repliées RBP communiqués de vitamine A contamination bactérienne facilement et en préparation RBP peut causer des artefacts. Techniques de surveillance en temps réel, comme l'électrophysiologie ont apporté des contributions essentielles aux études de transport membranaire. La RBP médiée par le récepteur de transport du rétinol n'a pas été analysé en temps réel jusqu'à récemment. La seconde technique décrite ici est la raisonl analyse en temps STRA6 catalysée par la libération de rétinol ou le chargement. La troisième technique est analyse en temps réel de STRA6 catalysée par le transport du rétinol à partir holo-RBP au cellulaire retinol binding protein I (CRBP-I). Ces techniques offrent une sensibilité et une résolution élevées en révélant récepteur de la vitamine RBP Un mécanisme de captation.

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