競争力のあるマウス骨髄移植モデルにおけるドナー細胞の生着を​​決定するために、定量的リアルタイムPCRを用いて

マウス骨髄移植モデルは、造血幹細胞（HSC）の機能および決定遺伝子/ HSCを調節する分子を測定する際の重要なツールを提供します。これらの移植モデルシステムでは、造血幹細胞の機能が生着し、再構成する致死量の放射線を照射したレシピエントマウスにこれらの細胞の能力によって決定されます。一般的には、ドナー細胞の寄与/生着は、フローサイトメトリーを用いたドナー特異的な細胞表面タンパク質に対する抗体によって測定されます。しかし、この方法は、大きく特異性とすべてのマウス系統では使用できない場合があり、受信者から発信された細胞からドナー由来細胞を区別するために、細胞表面マーカーの能力に依存します。市場では遺伝的に改変されたマウス系統の様々な背景を考えると、この細胞表面/フローサイトメトリーベースの方法は、特にジェニック受け手CEから独立したドナー細胞に明確に定義された表面マーカーを欠いているマウス系統に重大な制限がありますLLS。ここでは、移植レシピエントマウスにおけるドナー細胞の生着/寄与を決定するために、PCRベースの手法を報告した。私たちは、致死量の放射線を照射ジェニック雌マウスに男性ドナー骨髄の造血幹細胞を移植した。末梢血試料を異なる時点の移植後に採取した。骨髄サンプルは、実験の終了時に得られた。ゲノムDNAを単離し、Y染色体特異的遺伝子、Zfy1は、定量的リアルタイムPCRを用いて増幅した。女性レシピエントマウスにおける男性ドナー由来細胞の生着は、男性対女性のDNAの既知の割合で標準曲線に対して算出した。 BCL2は、総DNA量を正規化するために参照遺伝子として用いた。我々のデータは、このアプローチは確実にドナー細胞の生着を​​決定し、マウス骨髄移植モデルにおける造血細胞再構成を測定するのに有用な、まだ簡単な方法を提供することが示唆された。本手法は、日常的にほとんどの研究室で行うことができるため、ノーこのようなフローサイトメトリーなどの高価な機器が必要です。