Använda kvantitativ realtids-PCR för att avgöra Engraftment donatorcellen i en konkurrenskraftig Murine Bone Marrow Transplantation Modell

Murina benmärgstransplantation modellerna ger ett viktigt verktyg för att mäta hematopoetiska stamceller (HSC) funktioner och bestämma gener / molekyler som reglerar HSCs. I dessa system transplanterade modell, är funktionen av HSC: er bestämdes genom förmågan hos dessa celler att ympa och rekonstituera letalt bestrålade mottagande möss. Vanligen är donatorcellen bidrag / ympning mäts genom antikroppar mot donator-specifika cellyteproteiner med flödescytometri. Detta beror dock metoden mycket på specificitet och förmåga cellytan markör för att skilja donator-härledda celler från mottagare-ursprung celler, som inte finns för alla musstammar. Med tanke på de olika bakgrunder av genetiskt modifierade musstammar på marknaden, har denna cellytan / flödescytometri-baserad metod betydande begränsningar, särskilt i musstammar som saknar väldefinierade ytmarkörer att separera donator celler från kongena mottagare ceLLS. Här rapporterade vi en PCR-baserad teknik för att bestämma ympning donatorcellen / bidrag i möss transplantatmottagare. Vi transplanterade manliga givare HSCs benmärgen att letalt bestrålade kongena honmöss. Perifera blodprover uppsamlades vid olika tidpunkter efter transplantation. Benmärgsprov erhölls vid slutet av experimenten. Genomiskt DNA isolerades och Y-kromosomen specifika genen, Zfy1, amplifierades med användning av kvantitativ realtids-PCR. Den inympning av manliga givare härledda celler i de kvinnliga mottagande mössen beräknades mot standardkurva med känd procentandel manliga kontra kvinnliga DNA. BCL2 användes som en referens gen att normalisera det totala DNA-mängden. Våra data tyder på att detta tillvägagångssätt tillförlitligt bestämmer engraftment givarcell och ger en användbar, men ändå enkel metod att mäta hematopoetiska celler rekonstitution i murina benmärgstransplantation modeller. Vår metod kan rutinmässigt i de flesta laboratorier eftersom ingakostsam utrustning såsom flödescytometri krävs.