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Biology

Purification des relevés de notes et de métabolites

Published: March 15th, 2013

DOI:

10.3791/50245

1Department of Neurology, McKnight Brain Institute, University of Florida , 2Department of Entomology and Nematology, University of Florida , 3Genetics Institute, Department of Molecular Genetics and Microbiology, University of Florida , 4McKnight Brain Institute, Department of Neuroscience, Genetics Institute, Center for Translational Research on Neurodegenerative Diseases, and Center for Movement Disorders and Neurorestoration, University of Florida

Pendant la dernière décennie, nous avons essayé de comprendre les mécanismes moléculaires et cellulaires de la dégénérescence neuronale utilisant la drosophile comme organisme modèle. Bien que les mouches des fruits fournissent des avantages évidents expérimentales, la recherche sur les maladies neurodégénératives a surtout compté sur les techniques traditionnelles, y compris l'interaction génétique, histologie, immunofluorescence et biochimie des protéines. Ces techniques sont efficaces pour mécaniste, guidés par les hypothèses des études qui conduisent à une compréhension détaillée du rôle des gènes uniques à des problèmes bien définis biologiques. Cependant, les maladies neurodégénératives sont très complexes et touchent à plusieurs organites cellulaires et les processus au fil du temps. L'avènement des nouvelles technologies et l'âge omiques offre une occasion unique de comprendre les perturbations mondiales cellulaires sous-jacents des maladies complexes. Organismes modèles comme la drosophile flexibles sont idéales pour l'adaptation de ces nouvelles technologies en raison de leur forte annottion et de traçabilité élevé. Un défi à ces petits animaux, cependant, est la purification de molécules suffisamment d'information (ADN, ARNm, protéines, métabolites) à partir de tissus hautement pertinents, tels que les cerveaux de mouches. D'autres défis consiste à recueillir un grand nombre de mouches pour la réplique expérimentale (critique pour la robustesse statistique) et l'élaboration de procédures cohérentes pour la purification de matériaux de haute qualité biologique. Ici, nous décrivons les procédures de collecte des milliers de têtes de mouches et l'extraction des transcriptions et des métabolites de comprendre comment les changements globaux dans l'expression des gènes et le métabolisme contribuer à des maladies neurodégénératives. Ces procédures sont facilement évolutifs et peuvent être appliquées à l'étude des contributions protéomiques et épigénomiques à la maladie.

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