Abstract
Biology
稳定的miRNA是目前在所有的体液和一些循环miRNA是封存在小囊,称为外来免受降解。外来体可以在RNA和蛋白质转移到目标小区与质膜融合。它们的生物学功能包括免疫反应,抗原呈递细胞内的通信。受体细胞通过血液,可以调节基因表达的miRNA交付开辟了新的途径为目标的干预。除了提供交付药物或RNA的治疗药物的战略,exosomal内容可以作为生物标志物,可以帮助诊断,确定治疗方案和预后。
在这里,我们将介绍的程序定量分析miRNA和外来的信使RNA(mRNA)的分泌在血液和细胞培养基。纯化的外来的特点将是使用免疫印迹分析EXOS的OMAL标记和PCR检测mRNA的兴趣。透射电子显微镜(TEM)和免疫金标记将被使用的,来验证exosomal的形态和完整性。从这些外来体将纯化总RNA,以确保我们可以从相同的样本研究的mRNA和miRNA。验证RNA的完整性,生物分析仪后,我们会进行一个中等通量定量实时PCR(qPCR)的使用Taqman探针低密度阵列卡(TLDA)和基因表达研究感兴趣的成绩单,识别exosomal miRNA的。
这些协议可以用于量化的患者中,啮齿动物模型和药物干预前,后的细胞培养基改变exosomal的miRNA。不同的Exosomal内容来源及细胞分泌外来体的生理条件。这些变化,可以了解单元和系统如何应对压力或生理扰动。我们的有代表性的数据展示Variations的miRNA纯化小鼠血液,人体血液和人体细胞的培养基中存在的外来。
在这里,我们将介绍的程序定量分析miRNA和外来的信使RNA(mRNA)的分泌在血液和细胞培养基。纯化的外来的特点将是感兴趣的mRNA的的exosomal标记和PCR使用免疫印迹分析。透射电子显微镜(TEM)和免疫金标记将被使用的,来验证exosomal的形态和完整性。从这些外来体将纯化总RNA,以确保我们可以从相同的样本研究的mRNA和miRNA。验证RNA的完整性,生物分析仪后,我们会进行一个中等通量定量实时PCR(qPCR)的使用Taqman探针低密度阵列卡(TLDA)和基因表达研究感兴趣的成绩单,识别exosomal miRNA的。
这些协议可以用来量化的改变,在exosomal miRNA的我Ñ患者,啮齿类动物模型,药物干预前后细胞培养基。不同的Exosomal内容来源及细胞分泌外来体的生理条件。这些变化,可以了解单元和系统如何应对压力或生理扰动。我们的有代表性的数据显示变化的miRNA存在于外来鼠标血,人体血液和人体细胞培养介质纯化
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