血と文化メディア由来エキソソームの精製およびマイクロRNAプロファイリング

安定したmiRNAは、すべての体液中に存在し、いくつかの循環miRNAはエキソソームと呼ばれる小さな小胞に隔離による分解から保護されています。エキソソームは、標的細胞にRNAおよびタンパク質の転写をもたらす形質膜と融合することができる。彼らの生物学的機能は、免疫応答、抗原提示、および細胞内の通信が含まれています。血液を介した受容細胞における遺伝子発現を調節することができるmiRNAの配信では、ターゲットの介入のための新たな道を開いた。薬物またはRNA治療剤の送達のための戦略を提供するだけでなく、エキソソーム内容は、治療の選択肢と予後を決定する、診断に役立つことができるバイオマーカーとして役立つことができる。

ここでは、定量的に血液および細胞培養培地中に分泌されたエキソソームからのmiRNAとメッセンジャーRNA（mRNAの）を分析するための手順を説明する。精製エキソソームはEXOSためウェスタンブロット分析を用いて特徴づけされます関心のmRNAのためのOMALマーカーとPCR。透過電子顕微鏡（TEM）および免疫金標識は、エキソソーム形態と整合性を検証するために使用される。全RNAを、我々は同じサンプルからmRNAおよびmiRNAの両方を勉強できるようにするために、これらのエキソソームから精製されます。バイオアナライザによるRNAの完全性を検証した後、我々はタックマン低密度アレイ（本件契約）カードと関心の転写産物の遺伝子発現研究を使ってエキソソームのmiRNAを同定するために培地スループット定量的リアルタイムPCR（定量PCR）を行います。

これらのプロトコルは、薬理学的介入の前と後の患者、げっ歯類モデルおよび細胞培養培地中のエキソソームのmiRNAの変化を定量化するために使用することができる。エキソソーム内容が起源のソースと分泌するエキソソームその細胞の生理学的条件により変動する。これらの変化は、細胞とシステムがストレスや生理的な摂動に対処する方法についての洞察を提供することができます。当社の代表的なデータを示してVマウスの血液、ヒト血液およびヒト細胞培養培地から精製したエキソソームに存在するmiRNAでのariations。

ここでは、定量的に血液および細胞培養培地中に分泌されたエキソソームからのmiRNAとメッセンジャーRNA（mRNAの）を分析するための手順を説明する。精製エキソソームは、関心のあるmRNAのためのエキソソームマーカーおよびPCRのためのウェスタンブロット分析を用いて特徴付けられる。透過電子顕微鏡（TEM）および免疫金標識は、エキソソーム形態と整合性を検証するために使用される。全RNAを、我々は同じサンプルからmRNAおよびmiRNAの両方を勉強できるようにするために、これらのエキソソームから精製されます。バイオアナライザによるRNAの完全性を検証した後、我々はタックマン低密度アレイ（本件契約）カードと関心の転写産物の遺伝子発現研究を使ってエキソソームのmiRNAを同定するために培地スループット定量的リアルタイムPCR（定量PCR）を行います。

これらのプロトコルは、エキソソームのmiRNAの変化を定量化するために使用することができるiの薬理学的介入の前と後のn個の患者、げっ歯類モデル及び細胞培養培地。エキソソーム内容が起源のソースと分泌するエキソソームその細胞の生理学的条件により変動する。これらの変化は、細胞とシステムがストレスや生理的な摂動に対処する方法についての洞察を提供することができます。我々の代表的なデータは、マウスの血液、ヒト血液およびヒト細胞培養培地から精製エキソソーム中に存在するmiRNAの変化を示す