Generering av dispergert Presomitic mesoderm cellekulturer for Imaging av sebrafisk Segmentering Klokke i enkeltceller

Segmentering er en periodisk og sekvensiell morfogenetiske prosess i virveldyr. Dette rytmisk dannelsen av blokker av vev kalt somites langs kroppen aksen er bevis for en genetisk oscillator mønster utvikling av embryo. I sebrafisk, er den intracellulære klokke kjører segmentering består av medlemmer av hennes / Hes transkripsjonsfaktor familie organisert i negativ feedback loops. Vi har nylig generert transgene fluorescerende reporter linjer for den sykliske genet HER1 som rekapitulere den spatio-temporalt mønster av svingninger i presomitic mesoderm (PSM). Ved hjelp av disse linjene, har vi utviklet en in vitro kultur system som tillater sanntids analyse av segmentering klokke svingninger innenfor enkelt, isolerte PSM celler. Ved å fjerne PSM vev fra transgene embryoer og deretter spre celler fra oscillerende regioner på glassbunn retter, genererte vi kulturer som passer for time-lapse avbildning av fluorescens signal fraindividuelle klokke celler. Denne tilnærmingen gir en eksperimentell og konseptuelt rammeverk for direkte manipulasjon av segmentering klokke med enestående encellede oppløsning, slik at dets celle-autonom og vev-nivå egenskapene som skal skilles og dissekert.