Laser Capture mikrodissektion af beriget populationer af neuroner eller enkelte neuroner til genekspression analyse efter traumatisk hjerneskade

Langsigtet kognitive handicap efter TBI er forbundet med skade-induceret neurodegeneration i hippocampus-en region i den mediale tindingelappen, der er afgørende for indlæring, hukommelse og udøvende funktion. ^1,2 Deraf vores undersøgelser fokuserer på genekspression analyse af specifik neuronal populationer i særskilte underområder i hippocampus. Teknikken med laseropfangnings-mikrodissektion (LCM), blev indført i 1996 af Emmert-Buck, et al. ^Tre har muliggjort betydelige fremskridt inden for genekspression analyse af enkelte celler og berigede populationer af celler fra heterogene væv, såsom pattedyrs hjerne, der indeholder tusinder af funktionelle celletyper. ^fire Vi bruger LCM og en veletableret rottemodel for traumatisk hjerneskade (TBI) til at undersøge de molekylære mekanismer, der ligger til grund for pathogenesen af TBI. Efter fluidperkussion TBI, er hjerner fjernes på forudbestemte tidspunkter efter skaden, straks frosset på tøris,og forberedes til skæring i en kryostat. De rottehjerner kan indlejres i OLT og snittet straks eller gemmes flere måneder ved -80 ° C før sektionering til laser capture mikrodissektion. Derudover bruger vi LCM at studere virkningerne af TBI på døgnrytmen. Til dette fange vi neuroner fra suprachiasmatiske nuclei, som indeholder hovedkloksignalet i pattedyrs hjerne. Her viser vi anvendelse af LCM at opnå enkelte identificerede neuroner (skadet og degenererende, fluor-Jade-positive, eller ubeskadiget, fluor-Jade-negative) og berigede populationer af hippocampale neuroner for efterfølgende genekspressionsanalyse ved real time PCR og / eller hel-genom microarrays. Disse LCM-baserede undersøgelser har vist, at den selektive sårbarhed anatomisk distinkte områder af rottehippocampus afspejles i de forskellige genekspressionsprofiler fra forskellige populationer af neuroner opnået ved LCM fra disse forskellige områder. Resultaterne fra vores encellede studier, hvorvi sammenligner de transkriptionelle profiler for at dø og tilstødende overlevende hippocampale neuroner, at der eksisterer en celleoverlevelse rheostat, der regulerer celledød og overlevelse efter TBI.