Cel Bevolking Analyses Tijdens Skin Carcinogenesis

Kankerontwikkeling is een meerdere stappen waarbij vele celtypen waaronder kanker precursorcellen immune cellen, fibroblasten en endotheelcellen. Elk type cellen ondergaat signalering en functionele veranderingen tijdens carcinogenese. De huidige uitdaging voor veel kanker onderzoekers is om deze veranderingen in elk celtype ontleden tijdens de meervoudige-stap-proces in vivo. In de afgelopen jaren, hebben de auteurs een reeks procedures om de verschillende celpopulaties te isoleren tijdens huidkanker ontwikkeling met behulp K14creER/R26-SmoM2 ^YFP muizen ontwikkeld. De procedure is verdeeld in 6 delen: 1) het genereren van geschikte muizen voor de studie (K14creER ⁺ en R26-SmoM2 ^{YFP +} muizen in dit protocol); 2) induceren SmoM2 ^YFP expressie in de huid van muizen; 3) de voorbereiding muis huidbiopsies; 4) het isoleren epidermis van de huid; 5) bereiden enkele cellen uit epidermis; 6) labelen enkele cel populaties voor flowcytometrie-analyse.Generatie van voldoende aantal muizen met de juiste genotype is de beperkende stap in dit protocol, dat kan duren tot twee maanden. De rest van de stappen een paar uur tot een paar dagen. Binnen dit protocol, hebben we ook een sectie voor het oplossen van problemen. Hoewel we ons richten op huidkanker, kan dit protocol worden gewijzigd om toe te passen voor andere dierlijke modellen van menselijke ziekten.