直接成像诱导ER钙有针对性的酯酶染料装载（TED）

重要的是要了解钙的作用在细胞生理钙动态的可视化。要检查钙动力学，合成的Ca ^{2 +}荧光指示：已成为流行。在这里，我们展示了TED（=有针对性的酯酶诱导染料吸附量），一种方法来提高释放的Ca ^{2 +}指示剂染料在不同类型的细胞内质网腔。迄今为止，TED在细胞系，神经胶质细胞和神经元在体外使用。 TED快递羧酸酯酶（CES）的基础上高效，重组目标高羧酸酯酶活性使用载体构建到内质网腔。最新的TED载体包含CES2红色荧光蛋白融合的核心要素，从而使两色同时成像。在ER中的游离钙离子的动态成像的一种颜色，而相应的ER​​结构以红色显示。的程序开始时，用慢病毒转导细胞。随后，受感染的细胞重新接种于盖玻片终于使活细胞成像的。然后，活细胞培养与乙酰甲酯（AM -酯）的形式，低亲和力的Ca ^{2 +}指标，例如，MAG-Fluo4-AM Fluo5N-AM或MAG Fura2的调幅。在ER内酶切关闭从AM的Ca ^{2 +}指示剂和亲水性荧光染料/ Ca ^{2 +}的复合物形式的疏水性侧链的酯酶活性的内质网腔中形成并聚集。染料吸附量后，将细胞在一个倒置的共聚焦激光扫描显微镜分析。细胞连续灌流林格类似的解决方案和ER钙动力学直接可视化的时间推移成像。从内质网的钙离子的释放是确定的感兴趣区域的荧光强度下降，ER钙库的再填充而产生的荧光强度的增加。最后，荧光强度随时间的变化ΔF/ F ₀通过计算确定。