Recombineering مثلي التركيبات التوحد في

سوف التطوير المستمر لتقنيات سريع، والتلاعب على نطاق واسع من مواضع الجينات الذاتية توسيع استخدام ذبابة الفاكهة السوداء البطن باعتباره النموذج الحي الوراثية للبحوث المتصلة الأمراض التي تصيب البشر. وقد شهدت السنوات الأخيرة التقدم التقني مثل إعادة التركيب مثلي وrecombineering. ومع ذلك، وتوليد الطفرات باطل لا لبس فيه أو البروتينات الذاتية علامات يبقى جهدا كبيرا لمعظم الجينات. هنا، نحن تصف وشرح تقنيات واستخدام أساليب الاستنساخ القائم على recombineering لتوليد نواقل التي يمكن استخدامها لاستهداف ومعالجة مواضع الذاتية في الجسم الحي على وجه التحديد، وقد أنشأنا مجموعة من ثلاث تقنيات: (1) نقل الجينات BAC / recombineering، ( 2) تنتهي إجراءات المغادرة مثلي إعادة التركيب و (3) التكنولوجيا بوابة لتوفير وسيلة قوية وفعالة ومرنة لمعالجة مواضع الجيني الذاتية. في هذا البروتوكول، ونحن نقدم التفاصيل خطوة بخطوة حول كيفية (1) تصميم individuaناقلات لتر، (2) كيفية استنساخ شظايا كبيرة من الحمض النووي الجيني في ناقلات إعادة التركيب مثلي باستخدام إصلاح الفجوة، و (3) كيفية استبدال أو علامة الجينات في المصالح داخل هذه النواقل باستخدام الجولة الثانية من recombineering. وأخيرا، فإننا نقدم أيضا بروتوكول لكيفية تعبئة هذه الأشرطة في الجسم الحي لتوليد بالضربة القاضية، أو الجينات المرتبطة دلاليا عبر الضربة القاضية في. ويمكن بسهولة أن اعتمدت هذه الأساليب لأهداف متعددة في نفس الوقت وتوفير وسيلة لمعالجة جينوم ذبابة الفاكهة في الوقت المناسب وبطريقة فعالة.