In vivo avbildning av tumor angiogenese med fluoresens Confocal Videomicroscopy

Fibered konfokal fluorescens in vivo imaging med en fiberoptisk bunt er det samme prinsippet som fluorescerende konfokal mikroskopi. Det kan eksitere fluorescerende in situ elementene gjennom de optiske fibre, og så ta opp noen av de utsendte fotoner, via de samme optiske fiber. Lyskilden er en laser som sender ekssitering av lys gjennom et element inne i fiberbunten, og som skanner over prøven, gjenskaper et bilde piksel for piksel. Som denne skanningen er veldig fort, ved å kombinere den med dedikert programvare for bildebehandling, kan bilder i sanntid med en frekvens på 12 bilder / sek oppnås.

Vi utviklet en teknikk for å kvantitativt karakter kapillær morfologi og funksjon, ved hjelp av en confocal fluorescens videomicroscopy enhet. Det første trinnet i eksperimentet vårt var å spille inn 5 sek filmer i de fire kvadrantene av svulsten for å visualisere kapillær nettverk. Alle filmene ble behandlet ved hjelp av programvare (jegmageCell, Mauna Kea Technology, Paris Frankrike) som utfører en automatisk segmentering av fartøyer rundt en valgt diameter (10 mikrometer i vårt tilfelle). Dermed kan vi kvantifisere "funksjonelle kapillære tetthet", som er forholdet mellom det totale fartøy området og det totale areal av bildet. Denne parameteren var en surrogatmarkør for mikrovaskulær tetthet, vanligvis målt ved hjelp av patologi verktøy.

Det andre trinn var å ta opp film av svulsten løpet av 20 min for å kvantifisere lekkasje av det makromolekylære kontrastmiddel gjennom kapillære vegg inn i interstitium. Ved å måle forholdet mellom signalintensitet i interstitium over det i skipene, ble en 'index lekkasje' innhentet, fungerer som en surrogatmarkør for kapillær permeabilitet.