In vivo avbildning av blodkärl i tumören med hjälp av fluorescens Confocal videomikroskopi

Fibered konfokal fluorescens bildåtergivning in vivo med ett fiberoptiskt knippe använder samma princip som fluorescerande konfokalmikroskopi. Den kan excitera fluorescerande in situ-element genom de optiska fibrerna, och sedan spela in några av de emitterade fotonerna, via samma optiska fiber. Ljuskällan är en laser som sänder det exciterande ljuset genom ett element i fiberknippet och när den skannar över provet, återskapar en bild pixel för pixel. Eftersom den här analysen är mycket snabb, genom att kombinera den med dedikerade bildbehandlingsprogram, kan bilder i realtid med en frekvens på 12 bilder / sek uppnås.

Vi utvecklade en teknik för att kvantitativt karakterisera kapillär morfologi och funktion, med hjälp av en konfokala fluorescens videomikroskopi enhet. Det första steget i vårt experiment var att registrera 5 sec filmer i de fyra kvadranterna av tumören för att visualisera det kapillära nätverket. Samtliga filmer har bearbetats med hjälp av programvara (ImageCell, Mauna Kea Technology, Paris Frankrike) som utför en automatisk segmentering av fartyg runt en vald diameter (10 mikrometer i vårt fall). Således kan vi kvantifiera "funktionell kapillär densitet", som är förhållandet mellan den totala kärlet området och den totala ytan av bilden. Denna parameter var en surrogatmarkör för mikrovaskulära densitet, vanligtvis mäts med användning av patologiverktyg.

Det andra steget var att spela in filmer i tumören under 20 minuter för att kvantifiera läckage av det makromolekylära kontrastmedel genom kapillärväggen i interstitium. Genom att mäta förhållandet av signalintensiteten i interstitium över det i kärlen, var en "index läckage" som erhållits, i egenskap av en surrogatmarkör för kapillär permeabilitet.