В естественных нейронных изображений кальция в C. Элеганс

Нематоды червя C. Элеганс является идеальной моделью для организма относительно простые, недорогие нейронов изображения в естественных условиях. Его маленький прозрачный корпус и простое, хорошо характеризуется нервная система позволяет идентифицировать и флуоресценции любого нейрона в интактных животных. Простые методы иммобилизации при минимальном воздействии на физиологию животного позволяет увеличить покадровой обработки изображений. Развитие генетически закодированный кальция чувствительной флуорофоры, такие как Cameleon ¹ и ² позволяют GCaMP в естественных изображений нейронов кальцием, касающихся как физиология клетки и активность нейронов. Многочисленные трансгенных линий выражения этих флуорофоров в конкретные нейроны являются доступными или могут быть построены с использованием хорошо известных методов. Здесь мы описываем подробные процедуры для измерения кальция динамику в пределах одного нейрона в естественных условиях, используя как GCaMP и Cameleon. Мы обсудим преимущества и disadvantвозраст обоих, а также различные методы подготовки образцов (животных иммобилизации) и анализа изображений. Наконец, мы представляем результаты двух экспериментов: 1) С помощью GCaMP для измерения сенсорные реакции конкретного нейрона на внешнее электрическое поле и 2) Использование Cameleon для измерения физиологической реакции кальция в нейрон травматического повреждения лазера. Кальций методы визуализации, такие как они широко используются в C. Элеганс и были распространены на измерения в свободном перемещении животных, несколько нейронов одновременно и сопоставления между генетического фона. C. Элеганс представляет собой надежную и гибкую систему в естественных нейронных изображений с преимуществами по сравнению с другими системами модель в технической простоте и стоимости.