Effektiv og hurtig Isolering af Debuterende embryoner fra

I blomstrende planter, udvikler fosteret inden for en nærende væv - endosperm - omgivet af de maternelle frø hinderne (eller frøskal). Som en konsekvens heraf er isolation af plante embryoner i de tidlige faser (1 celle til kugleformede etape) teknisk udfordrende på grund af deres relative utilgængelighed. Effektiv manuel dissektion på tidlige stadier er stærkt svækket af den lille størrelse af unge Arabidopsis frø og klæbeevne af foster til det omgivende væv. Her beskriver vi en metode, der giver en effektiv isolering af unge Arabidopsis embryoner, hvilket gav op til 40 embryoner i 1 time til 4 timer, afhængigt af den efterfølgende anvendelse. Fostre, der frigives i isolation buffer med lidt knusning 250-750 frø med en plastik pistil i en Eppendorf rør. Et glas microcapillary tilknytning til enten en standard laboratoriepipette (via en gummislange) eller en hydraulisk styret microinjector bruges til at indsamle embryoner fra dråber stedd på en multi-godt slide på en inverteret lysmikroskop. De nødvendige tekniske færdigheder er enkel og let omsættelige, og den grundlæggende opsætning ikke kræver dyrt udstyr. Embryoner indsamlet er egnet til en lang række efterfølgende anvendelser, såsom RT-PCR, RNA-sekventering, methylering af DNA analyser, fluorescens in situ hybridisering (FISH), immunfarvning, og reportergenassays.