Quantitative Analysis multispettrali Dopo tessuto fluorescente Trapianto per la visualizzazione delle origini cellulari, tipi e interazioni

Con il desiderio di comprendere contributi di molteplici elementi cellulari allo sviluppo di un tessuto complesso, come i numerosi tipi di cellule che partecipano rigenerazione tissutale, formazione di tumori, o vasculogenesi, abbiamo ideato un multicolore modello trapianto cellulare di sviluppo del tumore in che le popolazioni di cellule provengono da diversi colori giornalista topi del gene modo fluorescente e vengono trapiantate, innestate o iniettati dentro e intorno un tumore in via di sviluppo. Queste cellule colorate vengono poi reclutati e inseriti nel stroma tumorale. Al fine di valutare quantitativamente midollo osseo derivate cellule stromali del tumore, abbiamo trapiantato GFP che esprimono tutta transgenica midollo osseo in RFP letale irraggiato esprimere topi come approvato dalla IACUC. 0ovarian tumori che sono stati ortotopicamente iniettato nei topi trapiantati sono stati asportati 6-8 settimane dopo l'attecchimento e analizzati per marcatore midollo osseo di origine (GFP) e marcatori anticorpali per rilevare tumore associatostroma utilizzando tecniche di imaging multispettrale. Abbiamo poi adattato una metodologia che chiamiamo MIMicc-multispettrale Interrogatorio di composizioni cellulari multiplex, utilizzando unmixing multispettrale di fluoroprobes per valutare quantitativamente cui etichettato cellule venuto da cui le popolazioni a partire (in base giornalista originali etichette geni), e la nostra capacità di unmix 4, 5 , 6 o più spettri per aumenti di diapositive, abbiamo aggiunto immunoistochimica aggiuntivi associati a linee cellulari o differenziazione per aumentare la precisione. Utilizzando il software di rilevare i segnali multiplex fluorescente co-localizzate, le popolazioni stromali tumorali possono essere rintracciati, annotate e caratterizzate sulla base di marcatore colorazione. ¹