Kvantitativ Multispectral Analyse Etter Fluorescent Tissue Transplant for visualisering av Cell Origins, Typer, og interaksjoner

Med ønske om å forstå bidragene fra flere cellulære elementer til å utvikle et sammensatt vev, slik som de tallrike celletyper som deltar i regenererende vev, tumordannelse, eller vaskulogenese, har vi utviklet en flerfarget celletransplantasjonsmodell for tumorutvikling som cellepopulasjoner stammer fra forskjellige fluorescently fargede reporter gen mus og er transplantert, innpodet eller injiseres i og rundt et utviklings svulst. Disse fargede cellene blir deretter rekruttert og inkorporert inn i svulsten stroma. For å kvantitativt vurdere benmarg avledet stromale tumorceller, transplantert vi GFP uttrykker transgene hele benmarg inn lethally bestrålt RFP uttrykke mus som er godkjent av IACUC. 0ovarian svulster som ble orthotopically injisert i de transplanterte musene ble skåret i 6-8 uker etter engraftment og analysert for benmargs markør utstedt (GFP), så vel som antistoff-markører for å påvise tumor assosiertstroma bruker multispektrale bildeteknikker. Vi deretter tilpasset en metode vi kaller MIMicc-Multispectral Avhør av multiplekskanaler cellulære komposisjoner, ved hjelp av multispektrale unmixing av fluoroprobes til kvantitativt vurdere hvilke merket celle kom fra hvilke start populasjoner (basert på originale reporter gen etiketter), og som vår evne til å unmix 4, 5 , 6 eller flere spektra per lysbilde øker, har vi lagt ekstra immunhistokjemi forbundet med celle linjene eller differensiering for å øke presisjonen. Utnytte programvare for å oppdage samlokalisert multipleksede-fluorescerende signaler, svulst stromal populasjoner kan spores, oppregnet og preget basert på markør farging. ¹