En enkel og effektiv metode til at påvise Nuclear Factor Aktivering i humane neutrofiler ved flowcytometri

Neutrofiler er de mest udbredte leukocytter i perifert blod. Disse celler er de første til at blive vist på steder med inflammation og infektion, og blev dermed den første linje i forsvaret mod invaderende mikroorganismer. Neutrofiler har vigtige antimikrobielle funktioner såsom fagocytose, frigivelse af lytiske enzymer, og produktionen af ​​reaktive oxygenspecies. Ud over disse vigtige forsvar funktioner, udfører neutrofiler andre opgaver som reaktion på infektion, såsom produktion af proinflammatoriske cytokiner og inhibering af apoptose. Cytokiner rekruttere andre leukocytter, der hjælper klare infektionen, og inhibering af apoptose tillader neutrofil at leve længere på stedet for infektion. Disse funktioner er reguleret på niveauet for transkription. Men da neutrofiler er kortlivede celler, kan studiet af transkriptionelt regulerede responser i disse celler ikke udføres med konventionelle reportergen metoder, da der ikke er nogen effektifaktor teknikker til neutrofil transfektion. Her præsenteres en simpel og effektiv fremgangsmåde, der tillader detektering og kvantificering af nukleare faktorer i isoleret og immunolabeled kerner ved flowcytometri. Vi beskriver teknikker til at isolere rene neutrofiler fra humant perifert blod, stimulere disse celler med anti-receptor-antistoffer, isolere og immunolabel kerner, og analysere kerner ved flowcytometri. Fremgangsmåden er med succes blevet anvendt til påvisning af NF-KB og Elk-1 nukleare faktorer i kerner fra neutrofiler og andre celletyper. Således er denne fremgangsmåde repræsenterer en indstilling til analyse af aktivering af transkriptionsfaktorer i isolerede kerner fra en række celletyper.