Metabolomics irrelevantes de fontes biológicas Usando UltraPerformance cromatografia líquida de alta resolução Espectrometria de Massa (UPLC-HRMS)

Apresentamos aqui um fluxo de trabalho para analisar os perfis metabólicos para amostras biológicas de interesse, incluindo: as células, soro ou tecido. A amostra é primeiro separado em fracções polares e não polares por uma extracção de fase líquido-líquido, e parcialmente purificada para facilitar a análise a jusante. Ambos aquosas (metabolitos polares) e orgânicos fases (metabólitos não-polares) da extracção inicial são processados ​​para pesquisar uma ampla variedade de metabolitos. Os metabolitos são separados por diferentes métodos de cromatografia líquida com base em suas propriedades de partição. Neste método, apresentamos microfluxo ultra eficiência (UP), os métodos de LC, mas o protocolo é adaptar a fluxos mais elevados e pressões mais baixas. Introdução no espectrômetro de massa pode ser, quer através de condições de origem optimizado gerais ou composto. A detecção de uma ampla gama de iões é efectuada em modo de varrimento completo no modo positivo e negativo numa larga gama m / z usando alta resolução num recentemente cinstrumento alibrated. Etiqueta livre de análise diferencial é realizada em plataformas de bioinformática. Aplicações dessa abordagem incluem triagem metabólica caminho, descoberta de biomarcadores e desenvolvimento de medicamentos.