Produção de

Muitos organismos localizar mRNAs para destinos subcelulares específicas para a expressão do gene de controle espacial e temporalmente. Estudos recentes têm demonstrado que a maior parte do transcriptoma está localizada a uma posição não aleatória em células e de embriões. Uma abordagem para identificar mRNAs localizadas é purificar bioquimicamente uma estrutura celular de interesse e para identificar todos os transcritos associados. Usando tecnologias de sequenciamento de alto rendimento recentemente desenvolvidos agora é fácil identificar todos os RNAs associados com uma estrutura subcelular. Para facilitar a identificação do transcrito, é necessário trabalhar com um organismo com um genoma completamente sequenciado. Um sistema atractivo para a purificação bioquímica das estruturas celulares são extractos de ovos produzidos a partir da rã Xenopus laevis. No entanto, X. laevis atualmente não tem um genoma completamente seqüenciado, o que dificulta a identificação transcrição. Neste artigo descrevemos um métodopara a produção de extratos de ovos de um sapo relacionado, X. tropicalis, que tem um genoma completamente sequenciado. Nós fornecemos detalhes para a polimerização dos microtúbulos, purificação e isolamento transcrição. Embora este artigo descreve um método específico para a identificação dos transcritos associada aos microtúbulos, acreditamos que isso será facilmente aplicada a outras estruturas subcelulares e irá proporcionar um método poderoso para identificação de ARN localizadas.