Een chemische Screening Procedure voor Glucocorticoid Signalering met een zebravis larve luciferasereporter System

Glucocorticoïd stresshormonen en hun kunstmatige derivaten worden op grote schaal gebruikt medicijnen om de ontsteking te behandelen, maar een langdurige behandeling met glucocorticoïden kan leiden tot ernstige bijwerkingen. Testsystemen nodig om te zoeken naar nieuwe verbindingen beïnvloeden glucocorticoïde signalering in vivo of ongewenste effecten van verbindingen op de glucocorticoïde signaleringsroute bepalen. We hebben een transgene zebravis test die de meting van glucocorticoïde signalerende activiteit kan in vivo en in real-time gevestigd, Grizly assay (glucocorticoïde reagerende In vivo zebravis luciferaseactiviteit). De luciferase-gebaseerde test detecteert effecten op glucocorticoïd signalering met een hoge gevoeligheid en specificiteit, met inbegrip van effecten door verbindingen die metabolization nodig hebben of van invloed endogene glucocorticoïden productie. We presenteren hier een gedetailleerd protocol voor het uitvoeren van chemische schermen met deze assay. We beschrijven data-acquisitie, normalisatie enanalyse, het plaatsen van een focus op kwaliteit en data visualisatie. De assay is een eenvoudige, tijdsopgeloste en kwantitatieve uitlezing. Het kan worden gebruikt als een stand-alone platform, maar is ook eenvoudig te integreren in high-throughput screening workflows. Het staat bovendien voor vele toepassingen buiten chemische screening, zoals milieu-monitoring van endocriene verstoorders of stressonderzoek.