הליך מיון כימי לGlucocorticoid איתות עם מערכת כתב דג הזברה הזחל בלוציפראז

הורמוני לחץ glucocorticoid ונגזרים המלאכותי שלהם נמצאים בשימוש נרחב תרופות לטיפול בדלקת, אבל טיפול ארוך טווח עם גלוקוקורטיקואידים יכול להוביל לתופעות לוואי חמורים. יש צורך במערכות בדיקה כדי לחפש תרכובות רומן המשפיעות על איתות glucocorticoid in vivo או לקבוע לוואי בלתי רצוי של תרכובות במסלול איתות glucocorticoid. הקמנו assay דג הזברה מהונדס המאפשר המדידה של פעילות איתות glucocorticoid in vivo ו בזמן אמת, assay GRIZLY (Glucocorticoid תגובה בvivo דג הזברה בלוציפראז פעילות). Assay מבוסס לוציפראז מזהה השפעות על איתות glucocorticoid עם רגישות גבוהה וספציפיות, כוללים השפעות על ידי תרכובות שתידרשנה metabolization או להשפיע על ייצור glucocorticoid אנדוגני. אנו מציגים כאן פרוטוקול מפורט לביצוע מסכי כימיים עם assay זה. אנו מתארים רכישת נתונים, נורמליזציה, וניתוח, הצבת דגש על בקרת איכות ונתונים להדמיה. Assay מספק readout פשוט, זמן נפתר, וכמותי. זה יכול להיות מופעל כפלטפורמה עצמאית, אבל גם לשלב בקלות לתוך זרימות עבודה הקרנת תפוקה גבוהה. יתר על כן הוא מאפשר ליישומים רבים מעבר להקרנה כימית, כגון ניטור סביבתי של משבשים האנדוקרינית או מחקר לחץ.