ゼブラフィッシュ幼虫ルシフェラーゼレポーターシステムを用いたグルココルチコイドシグナル伝達のための化学スクリーニング法

グルココルチコイドストレスホルモンおよびそれらの人工的誘導体は、広く炎症を治療する薬剤を用いているが、グルココルチコイドによる長期治療は、重篤な副作用をもたらすことができる。試験系は、in vivoでのグルココルチコイドシグナル伝達に影響を与える新規な化合物を探索するか、またはグルココルチコイドシグナル伝達経路に対する化合物の望ましくない効果を決定するために必要とされる。我々は、 生体内でリアルタイムでグルココルチコイドシグナル伝達活性を測定することができるトランスジェニックゼブラフィッシュアッセイを確立している、GRIZLYアッセイ（グルココルチコイド、生体ゼブラフィッシュルシフェラーゼ活性の応答）。ルシフェラーゼに基づくアッセイは、代謝を必要とするか、内因性のグルココルチコイドの生産に影響を与える化合物による影響を含め、高感度と特異性を有するグルココルチコイドシグナル伝達への影響を検出します。ここでは、このアッセイと化学スクリーンを行うための詳細なプロトコルを提示する。我々は、データ収集、正規化などを記述する分析、品質管理およびデータの可視化に焦点を置く。アッセイは、単純な、時間分解、および定量的な読み出しを提供しています。それは、スタンドアロンのプラットフォームとして動作させることができるだけでなく、容易にハイスループットスクリーニングのワークフローに統合される。それはさらに、このような内分泌かく乱物質やストレス研究の環境モニタリングなどの化学スクリーニングを超えて多くのアプリケーションを可能にする。