A Triagem procedimento químico para Glucocorticoid Sinalização com um Sistema Reporter Zebrafish Zergling luciferase

Hormonas de stress glicocorticóides e seus derivados artificiais são amplamente utilizadas drogas para o tratamento de inflamação, mas um tratamento a longo prazo com glucocorticóides pode levar a efeitos colaterais graves. Os sistemas de ensaio são necessários para pesquisar novos compostos que influenciam a sinalização de glucocorticóide in vivo ou para determinar os efeitos indesejados dos compostos sobre a via de sinalização de glucocorticóides. Nós estabelecemos um ensaio zebrafish transgênicos que permite a mensuração da atividade de sinalização glicocorticóide in vivo e em tempo real, o ensaio grizly (Glucocorticoid Responsive In vivo Zebrafish luciferase atividade). O ensaio baseado luciferase detecta efeitos na sinalização glicocorticóide com elevada sensibilidade e especificidade, incluindo os efeitos de compostos que requerem metabolização ou afectam a produção de glucocorticóide endógeno. Apresentamos aqui um protocolo detalhado para a realização de telas químicas com este ensaio. Descrevemos aquisição de dados, normalização eanálise, colocando o foco no controle de qualidade e visualização de dados. O ensaio fornece, resolvida no tempo, e quantitativa uma leitura simples. Pode ser operado como uma plataforma independente, mas também é facilmente integrado de alto rendimento fluxos de trabalho de triagem. É, além disso, permite muitas aplicações além triagem química, tais como monitoramento ambiental de disruptores endócrinos ou investigação stress.