Schnell Fluorescent

Kombinieren RNA Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) mit Immunfluoreszenz (Immuno-FISH) schafft eine Technik, die auf der Ebene einzelner Zellen verwendet werden können, um die räumliche Dynamik RNA Lokalisierung mit gleichzeitige Einblick in die Lokalisierung von Proteinen, epigenetische Modifikationen und andere Details zu detektieren die durch Immunfluoreszenz markiert werden kann. X-Chromosom-Inaktivierung ist ein Paradigma für lange nicht-kodierende RNA (lncRNA) vermittelte Gen-Silencing. X-inaktiven spezifischen Transkripts (Xist) lncRNA Ansammlung (genannt Xist Wolke) an einem der beiden X-Chromosomen in weiblichen Säugern ist ein kritischer Schritt, um X-Chromosom Inaktivierung initiieren. Xist-RNA direkt oder indirekt in Wechselwirkung mit verschiedenen Chromatin-modifizierende Enzyme und stellt verschiedene epigenetischen Landschaften in den inaktiven X-Chromosom (Xi). Eine bekannte epigenetischen Kennzeichen der Xi ist der Histone H3 trimethyl-Lysin-27 (H3K27me3) Änderung. Hier haben wir eine einfache und schnelle Immun FISH beschreibenProtokoll zum Nachweis von Xist-RNA mit RNA-FISH mit mehreren Oligonukleotid-Sonden in Verbindung mit Immunfluoreszenz von H3K27me3, um die Lokalisierung von Xist-RNA und die damit verbundenen epigenetische Veränderungen zu untersuchen. Verwendung von Oligonucleotidsonden zu einer kürzeren Inkubationszeit und empfindlicher Nachweis von Xist RNA im Vergleich zu in vitro transkribierte RNA-Sonden (Ribosonden). Dieses Protokoll stellt ein leistungsfähiges Werkzeug für das Verständnis der Dynamik von lncRNAs und die damit verbundenen epigenetische Modifikation der Chromatinstruktur, Kern Organisation und Transkriptionsregulation.