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Abstract

Biology

त्वरित फ्लोरोसेंट

Published: November 26th, 2014

DOI:

10.3791/52053

1Division of Reproductive Sciences, Cincinnati Children's Hospital Medical Center, 2Department of Pediatrics, University of Cincinnati College of Medicine

* These authors contributed equally

Abstract

इम्यूनोफ्लोरेसेंस (इम्युनो-मछली) के साथ सीटू संकरण (मछली) में शाही सेना फ्लोरोसेंट संयोजन प्रोटीन, epigenetic संशोधनों और अन्य विवरण के स्थानीयकरण में एक साथ अंतर्दृष्टि के साथ शाही सेना स्थानीयकरण के स्थानिक गतिशीलता का पता लगाने के लिए एकल कोशिका के स्तर पर नियोजित किया जा सकता है कि एक तकनीक बनाता है जो इम्यूनोफ्लोरेसेंस से प्रकाश डाला जा सकता है। एक्स गुणसूत्र निष्क्रियता लंबे समय से गैर-कोडिंग आरएनए (lncRNA) मध्यस्थता जीन मुंह बंद करने के लिए एक प्रतिमान है। स्तनधारी महिलाओं में दो एक्स क्रोमोसोम में से एक पर (एक Xist बादल कहा जाता है) एक्स निष्क्रिय विशिष्ट प्रतिलेख (Xist) lncRNA संचय एक्स गुणसूत्र निष्क्रियता आरंभ करने के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है। Xist शाही सेना सीधे या परोक्ष रूप से विभिन्न क्रोमेटिन संशोधित एंजाइमों के साथ सूचना का आदान प्रदान और निष्क्रिय एक्स गुणसूत्र (ग्यारहवीं) के लिए अलग epigenetic परिदृश्य का परिचय। ग्यारहवीं में से एक में जाना जाता epigenetic बानगी histone H3 trimethyl-लाइसिन 27 (H3K27me3) संशोधन है। यहाँ, हम एक सरल और त्वरित इम्युनो-मछली का वर्णनXist शाही सेना के स्थानीयकरण और संबद्ध epigenetic संशोधनों की जांच करने के H3K27me3 की इम्यूनोफ्लोरेसेंस के साथ युग्मित कई oligonucleotide जांच के साथ शाही सेना मछली का उपयोग कर Xist आरएनए का पता लगाने के लिए प्रोटोकॉल। Oligonucleotide जांच एक छोटी ऊष्मायन समय में परिणाम और इन विट्रो लिखित शाही सेना जांच (riboprobes) की तुलना में Xist शाही सेना के और अधिक संवेदनशील पता लगाने का उपयोग करना। इस प्रोटोकॉल lncRNAs की गतिशीलता और उसके संबंधित epigenetic संशोधन, chromatin संरचना, परमाणु संगठन और ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन को समझने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण प्रदान करता है।

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