Hızlı Floresan

Immünfloresans (immün-FISH) ile in situ hibridizasyon (FISH) RNA floresan proteinleri birleştiren, epigenetik değişiklikler ve diğer detaylar lokalizasyonu içine eşzamanlı bir bakış açısı ile RNA lokalizasyonu mekansal dinamiklerini tespit etmek için tek hücre düzeyinde istihdam edilebilir bir teknik oluşturur hangi immünofloresan vurgulanmış olabilir. X-kromozomu inaktivasyonu uzun olmayan kodlama RNA (lncRNA) aracılı gen susturulması için bir paradigma olduğunu. Memeli kadınlarda iki X-kromozom birinde (bir Xist bulut denir) X-inaktif özel transkript (Xist) lncRNA birikimi X-kromozomu inaktivasyonu başlatmak için kritik bir adımdır. Xist RNA doğrudan veya dolaylı olarak çeşitli kromatin-modifiye enzimler ile etkileşim ve inaktif X-kromozomu (Xi) için ayrı epigenetik manzara tanıttı. Xi biri bilinen epigenetik damgasını Histone H3 trimetil-lizin 27 (H3K27me3) değişiklik. Burada, biz basit ve hızlı bir immün FISH tarifXist RNA lokalizasyonu ve ilişkili epigenetik değişiklikleri incelemek için H3K27me3 immünofloransı ile birleştiğinde birden oligonükleotid probları ile RNA FISH kullanarak Xist RNA tespiti için protokol. Oligonükleotid probları daha kısa bir kuluçkalama süresi sonuçları in vitro ötelenmiş RNA probları (riboprobları) göre Xist RNA daha hassas algılama kullanılması. Bu protokol lncRNAs dinamiklerini ve ilgili epigenetik değişiklik, kromatin yapısı, nükleer organizasyon ve transkripsiyon düzenleme anlamak için güçlü bir araç sağlar.