الثقافات توليد الخلايا الليفية الأولية من ماوس الأذن والذيل الأنسجة

Summary

نحن تصف الإجراء التجريبي بسيطة وسريعة لتوليد الخلايا الليفية الأولية من الأذنين وذيول الفئران. لا يتطلب إجراء تدريب خاص الحيوان، ويمكن استخدامها لتوليد الثقافات الليفية من آذان المخزنة في RT لمدة تصل إلى 10 يوما.

Abstract

وتستمد الخلايا الأولية مباشرة من أنسجة ويعتقد أن يكون أكثر تمثيلا للالحالة الفسيولوجية للخلايا في الجسم الحي من خطوط الخلايا المحددة. ومع ذلك، ثقافات الخلية الأولية عادة ما يكون لها عمر محدود وتحتاج إلى كثير من الأحيان إعادة تأسيس. الليفية هي مصدر يمكن الوصول إليها بسهولة من الخلايا الأولية. هنا، نحن نناقش إجراء التجارب بسيطة وسريعة لإنشاء الثقافات الليفية الأولية من آذان وذيول الفئران. يمكن استخدامها على بروتوكول إنشاء الثقافات الليفية الأولية من آذان المخزنة في RT لمدة تصل إلى 10 يوما. عند اتباع البروتوكول بعناية، من غير المرجح أن تحدث على الرغم من استخدام الأنسجة غير معقمة تخزينها لفترة طويلة في بعض الحالات التلوث. الليفية تتكاثر بسرعة في الثقافة ويمكن توسيعها لتشمل أعداد كبيرة قبل ان يخضع الشيخوخة تنسخي.

Introduction

وتستمد الخلايا الأولية من الأنسجة ومثقف يعيشون في ظل ظروف في المختبر. ويفترض عموما أن الخلايا الأولية أكثر شبها الدولة الفسيولوجية والخلفية الوراثية من الأنسجة التي نشأت من خطوط الخلايا خلد أو ورم ^1. لهذا السبب، الخلايا الأولية تمثل نموذجا مفيدا لدراسة المسائل البيولوجية ^2،3. ولكن، على عكس خطوط الخلايا المنشأة التي تنمو إلى أجل غير مسمى، الخلايا الأولية تخضع في نهاية المطاف الشيخوخة في الثقافة وتحتاج إلى كثير من الأحيان إعادة تأسيس.

وتشمل الخلايا الأولية التي تستخدم عادة الخلايا الليفية، الخلايا الظهارية، وخلايا بطانة الأوعية الد....

Protocol

وتم إيواء الفئران في ظروف خالية من مسببات الأمراض وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية حتى euthanization (الرعاية المؤسسية الحيوان واللجنة الاستخدام (IACUC) المبادئ التوجيهية في جامعة سنغافورة الوطنية واللجنة الوطنية الاستشارية لمختبر أبحاث الحيوان (NACLAR) المبادئ التوجيهية).

Discussion

هنا نقدم إجراء التجارب بسيطة وغير مكلفة وسريعة لإنشاء الثقافات الليفية الأولية من آذان وذيول الفئران. استخراج ينبغي أن يؤدي إلى تقسيم الخلايا الليفية ملتصقة وبسرعة في غضون 3 أيام بعد العزلة من الأنسجة. قيود هاما من الخلايا الأولية هو الشيخوخة، وتوقف نمو دائم ^15........

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
RPMI-1640	HyClone	SH30027.01
Fetal Calf Serum	HyClone	SV30160.03
2-mercaptoethanol	Sigma-Aldrich	M3148
Asparagine	Sigma-Aldrich	A4159
Glutamine	Sigma-Aldrich	G8540
Penicillin/Streptomycin	HyClone	SV30010
Ethanol	Merck Millipore	107017	Absolute for analysis
Collagenase D	Roche Diagnostics	11088866001	From Clostridium histolyticum, lyophilized, non-sterile
Pronase protease	Merck Millipore	53702	From Streptomyces griseus
Tris buffer (pH 8)	1st BASE	1415	Ultra pure grade
0.5M EDTA (pH 8)	1st BASE	BUF-1053	Biotechnology grade
10X Phosphate Buffered Saline (PBS)	1st BASE	BUF-2040-10X4L	Ultra pure grade
Trypsin-EDTA solution 10X	Sigma-Aldrich	59418C-100ML	0.5% trypsin, 0.2% EDTA, trypsin gamma irradiated by SER-TAIN process, without phenol red, in saline
Amphotericin B	Sigma-Aldrich	A2492-20ml	250 μg/ml in deionized water, sterile-filtered
Scissors	Aesculap
Forcep	Aesculap	AE-BD312R
0.2 μM syringe filter	Sartorius Stedim	16534
70 μM cell strainer	SPL	93070
Syringe plunger	Terumo	SS+10L
Cryovial tube	NUNC	368362
1.7 ml microcentrifuge tube	Axygen	MCT-175-C
10 cm cell culture dish	Greiner	664160	Cell culture treated dish
15 ml conical bottom tube	Greiner	188271
50 ml conical bottom tube	Greiner	227261
Water bath	GFL	1002
Centrifuge	Eppendorf	5810R
Incubation shaker	Sartorius Stedim		Certomat-BS1
Zeiss Axiovert 25 light microscope	Carl Zeiss AG