माउस कान और पूंछ के ऊतकों से उत्पन्न प्राथमिक तंतुकोशिका संस्कृति

Summary

हम कान और चूहों की पूंछ से प्राथमिक fibroblasts पैदा करने के लिए एक सरल और त्वरित प्रयोगात्मक प्रक्रिया का वर्णन है। प्रक्रिया विशेष पशु प्रशिक्षण की आवश्यकता नहीं है और अप करने के लिए 10 दिनों के लिए आरटी पर संग्रहीत कान से fibroblast संस्कृतियों की पीढ़ी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

Abstract

प्राथमिक कोशिकाओं ऊतकों से सीधे प्राप्त कर रहे हैं और स्थापित सेल लाइनों से विवो में कोशिकाओं की शारीरिक स्थिति के अधिक प्रतिनिधि होने के लिए लगा रहे हैं। हालांकि, प्राथमिक सेल संस्कृतियों आम तौर पर एक परिमित जीवन काल है और बार-बार फिर से स्थापित किए जाने की जरूरत है। Fibroblasts प्राथमिक कोशिकाओं के एक आसानी से सुलभ स्रोत हैं। यहाँ, हम कान और चूहों की पूंछ से प्राथमिक fibroblast संस्कृतियों की स्थापना के लिए एक सरल और त्वरित प्रयोगात्मक प्रक्रिया पर चर्चा की। प्रोटोकॉल के लिए 10 दिनों के लिए आरटी पर संग्रहीत कान से प्राथमिक fibroblast संस्कृतियों स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। प्रोटोकॉल का सावधानी से पालन किया जाता है, संदूषण कुछ मामलों में विस्तारित समय के लिए भंडारित गैर बाँझ ऊतक के उपयोग के बावजूद घटित होने की संभावना नहीं है। Fibroblasts संस्कृति में तेजी से पैदा और replicative वार्धक्य से गुजरने के पहले पर्याप्त संख्या का विस्तार किया जा सकता है।

Introduction

प्राथमिक कोशिकाओं में इन विट्रो की शर्तों के तहत ऊतक और सुसंस्कृत रहने से निकाली गई है। यह आम तौर पर प्राथमिक कोशिकाओं को और अधिक बारीकी से शारीरिक स्थिति और वे अमर या ट्यूमर सेल लाइनों ¹ से शुरु हुआ, जिसमें से ऊतक के आनुवंशिक पृष्ठभूमि के समान माना जाता है कि। कारण है कि, प्राथमिक कोशिकाओं जैविक सवालों ^2,3 के अध्ययन के लिए एक उपयोगी मॉडल प्रतिनिधित्व करते हैं। हालांकि, अनिश्चित काल के बढ़ने कि स्थापित सेल लाइनों के विपरीत, प्राथमिक कोशिकाओं अंततः संस्कृति में वार्धक्य से गुजरना है और अक्सर फिर से स्थापित किए जाने की जरूरत है।

आमतौर पर इस्तेमाल किया प्राथमिक कोशिकाओं फ़ाइब्रोब्लास्ट, उपकला कोशिकाओं, endothel....

Protocol

चूहे euthanization तक संस्थागत दिशा निर्देशों (संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) के दिशा निर्देशों सिंगापुर के राष्ट्रीय विश्वविद्यालय में और प्रयोगशाला पशु अनुसंधान के लिए राष्ट्रीय सलाहकार समिति (NACLAR) के दि?.......

Discussion

यहाँ हम कान और चूहों की पूंछ से प्राथमिक fibroblast संस्कृतियों की स्थापना के लिए एक सरल, सस्ता और तेज प्रयोगात्मक प्रक्रिया प्रदान करते हैं। निकासी के ऊतक के 3 दिन बाद अलगाव के भीतर पक्षपाती और तेजी से विभाजि.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
RPMI-1640	HyClone	SH30027.01
Fetal Calf Serum	HyClone	SV30160.03
2-mercaptoethanol	Sigma-Aldrich	M3148
Asparagine	Sigma-Aldrich	A4159
Glutamine	Sigma-Aldrich	G8540
Penicillin/Streptomycin	HyClone	SV30010
Ethanol	Merck Millipore	107017	Absolute for analysis
Collagenase D	Roche Diagnostics	11088866001	From Clostridium histolyticum, lyophilized, non-sterile
Pronase protease	Merck Millipore	53702	From Streptomyces griseus
Tris buffer (pH 8)	1st BASE	1415	Ultra pure grade
0.5M EDTA (pH 8)	1st BASE	BUF-1053	Biotechnology grade
10X Phosphate Buffered Saline (PBS)	1st BASE	BUF-2040-10X4L	Ultra pure grade
Trypsin-EDTA solution 10X	Sigma-Aldrich	59418C-100ML	0.5% trypsin, 0.2% EDTA, trypsin gamma irradiated by SER-TAIN process, without phenol red, in saline
Amphotericin B	Sigma-Aldrich	A2492-20ml	250 μg/ml in deionized water, sterile-filtered
Scissors	Aesculap
Forcep	Aesculap	AE-BD312R
0.2 μM syringe filter	Sartorius Stedim	16534
70 μM cell strainer	SPL	93070
Syringe plunger	Terumo	SS+10L
Cryovial tube	NUNC	368362
1.7 ml microcentrifuge tube	Axygen	MCT-175-C
10 cm cell culture dish	Greiner	664160	Cell culture treated dish
15 ml conical bottom tube	Greiner	188271
50 ml conical bottom tube	Greiner	227261
Water bath	GFL	1002
Centrifuge	Eppendorf	5810R
Incubation shaker	Sartorius Stedim		Certomat-BS1
Zeiss Axiovert 25 light microscope	Carl Zeiss AG