Samtidig Bedömning av cardiomyocyte DNA-syntes och ploiditet: En metod för att Assist Kvantifiering av cardiomyocyte Regeneration och omsättning

Även om det är accepterat att hjärtat har en begränsad potential att regenerera hjärtmuskelceller efter skada och att låga nivåer av cardiomyocyte omsättning inträffar under normalt åldrande, kvantifiering av dessa händelser förblir utmanande. Detta beror delvis på att sällsynthet i processen och det faktum att flera cellulära källor bidrar till hjärtinfarkt underhåll. Dessutom leder ofta DNA dubbel inom cardiomyocytes till en polyploid cardiomyocyte och endast sällan leder till nya hjärtmuskelceller genom celldelning. I syfte att exakt kvantifiera cardiomyocyte diskriminering omsättning mellan dessa processer är av avgörande betydelse. Protokollet som beskrivs här använder långsiktig nukleosid märkning för att märka alla kärnor som har uppstått som ett resultat av DNA-replikation och cardiomyocyte kärnor som identifierats genom att använda kärnor isolering och efterföljande PCM1 immunomärkning. Tillsammans detta tillåter noggrann och känslig identifiering av nukleosid märkning av cardiomyocyte kärnor populationen. Vidare, 4 ', 6-diamidino-2-fenylindol märkning och analys av kärnorna ploiditet, möjliggör diskriminering av neo-cardiomyocyte kärnor från kärnor som har införlivat nukleosid under polyploidization. Även om denna metod inte kan kontrollera för cardiomyocyte binucleation, gör det en snabb och robust kvantifiering av neo-cardiomyocyte kärnor samtidigt står för polyploidization. Denna metod har ett antal tillämpningar nedströms inklusive bedöma potentiella läkemedel för att förbättra cardiomyocyte regenerering eller att undersöka effekterna av hjärtsjukdom på cardiomyocyte omsättning och ploiditet. Denna teknik är också kompatibel med ytterligare nedströms immunohistologiska tekniker, vilket möjliggör kvantifiering av nukleosid inkorporering i alla hjärtcelltyper.