Isolatie, Cultuur en Transductie van Adult Mouse Cardiomyocytes

Gekweekte hartspiercellen kunnen worden gebruikt om cardiomyocyt biologische technieken gebruiken die complementair is aan in vivo systemen te bestuderen. Bijvoorbeeld, de zuiverheid en de bereikbaarheid van in vitro kweek maakt fijne controle over biochemische analyses, live beeldvorming en elektrofysiologie. Langetermijnkweek cardiomyocyten biedt toegang tot aanvullende experimentele benaderingen die niet op korte termijn kweken kan worden voltooid. Bijvoorbeeld de in vitro onderzoek dedifferentiatie, celcyclus herintreding en celdeling tot nu toe grotendeels beperkt tot cardiomyocyten van de rat, die voorkomen robuuster langetermijnkweek zijn. Echter, de beschikbaarheid van een rijke toolset van transgene muizen lijnen en goed ontwikkelde ziekte modellen muis systemen aantrekkelijk voor cardiale onderzoek. Hoewel verschillende rapporten bestaan ​​van volwassen muis cardiomyocyt isolatie, enkele studies tonen aan hun lange termijn cultuur. Hier voorgesteld, is een stap-voor-stap werkwijze voor deisolatie en de lange termijn de cultuur van volwassen muis hartspiercellen. Eerst wordt retrograde Langendorff perfusie gebruikt om efficiënt verteren het hart met proteasen, gevolgd door zwaartekracht sedimentatie zuivering. Na een periode van dedifferentiatie na isolering, de cellen geleidelijk hechten aan de kweek en kan gekweekt weken. Adenovirus cellysaat wordt gebruikt om de geïsoleerde cardiomyocyten efficiënt transduceren. Deze methoden bieden een eenvoudige, maar krachtige modelsysteem om cardiale biologie studeren.