Isolamento, cultura e Transdução de rato adulto Cardiomyocytes

Cardiomiócitos cultivados podem ser usadas para estudar a biologia dos cardiomiócitos utilizando técnicas que são complementares a sistemas in vivo. Por exemplo, a pureza ea acessibilidade da cultura in vitro permite um controle fino sobre análises bioquímicas, imagens ao vivo e eletrofisiologia. cultura a longo prazo dos cardiomiócitos oferece acesso a abordagens experimentais adicionais que não podem ser concluídos em culturas de curto prazo. Por exemplo, a investigação in vitro de desdiferenciação, do ciclo celular de re-entrada e divisão de células tem, até agora, em grande parte sido restrita a cardiomiócitos de rato, que parecem ser mais robusta em cultura a longo prazo. No entanto, a disponibilidade de um rico conjunto de ferramentas de linhagens de camundongos transgênicos e modelos de doenças bem desenvolvidos tornar os sistemas de rato atraente para a investigação cardíaca. Embora existam vários relatos de rato adulto isolamento dos cardiomiócitos, alguns estudos demonstram sua cultura a longo prazo. Apresentado aqui, é um método passo-a-passo para oisolamento e longo prazo cultura de cardiomiócitos adultos do mouse. Em primeiro lugar, a perfusão de Langendorff retrógrada é usado eficientemente para digerir o coração com proteases, seguido por purificação por gravidade sedimentação. Após um período de desdiferenciação após o isolamento, as células gradualmente anexar à cultura e podem ser cultivadas por semana. ligado celular de adenovírus é utilizado para transduzir eficientemente os cardiomiócitos isolados. Esses métodos fornecem um simples sistema de modelo, mas poderosa para estudar a biologia cardíaca.