Aislamiento, cultivo y la transducción de cardiomiocitos de ratones adultos

Cultivos de cardiomiocitos se pueden utilizar para estudiar la biología de los cardiomiocitos usando técnicas que son complementarios a los sistemas in vivo. Por ejemplo, la pureza y la accesibilidad de cultivo in vitro permite un control preciso sobre los análisis bioquímicos, imágenes en vivo, y electrofisiología. cultivo a largo plazo de los cardiomiocitos ofrece acceso a los enfoques experimentales adicionales que no se pueden completar en cultivos de corto plazo. Por ejemplo, la investigación in vitro de desdiferenciación, ciclo celular de reentrada, y la división celular hasta el momento ha sido en gran parte restringido a los cardiomiocitos de rata, que parecen ser más robusto en cultivo a largo plazo. Sin embargo, la disponibilidad de un amplio conjunto de herramientas de líneas de ratones transgénicos modelos de enfermedad y bien desarrollados sistemas de ratón hacen atractiva para la investigación cardiaca. Aunque existen varios informes del aislamiento de los cardiomiocitos de ratón adulto, pocos estudios demuestran su cultivo a largo plazo. Se presenta aquí, es un método paso a paso para elel aislamiento y la cultura a largo plazo de los cardiomiocitos de ratones adultos. En primer lugar, retrógrada perfusión Langendorff se utiliza para digerir de manera eficiente el corazón con proteasas, seguido de purificación gravedad sedimentación. Después de un período de desdiferenciación después del aislamiento, las células se unen gradualmente a la cultura y pueden ser cultivadas durante semanas. lisado celular Adenovirus se utiliza para transducir eficientemente los cardiomiocitos aislados. Estos métodos proporcionan un potente sistema simple, modelo para estudiar la biología cardiaco.