इन विट्रो कॉलोनी assays में त्रिकोणीय शक्तिशाली पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं निस्र्पक के लिए एडल्ट Murine अग्न्याशय से पृथक

स्टेम और वयस्क अग्न्याशय से पूर्वज कोशिकाओं टाइप 1 मधुमेह के रोगियों के उपचार के लिए चिकित्सकीय बीटा कोशिकाओं की तरह का एक संभावित स्रोत हो सकता है। हालांकि, यह स्टेम कोशिकाओं और पूर्वज वयस्क अग्न्याशय में मौजूद है कि क्या अभी भी अज्ञात है। सीआरई-Lox वयस्क चूहों में वंश अनुरेखण का उपयोग कर अनुसंधान रणनीतियों परिणाम है कि या तो समर्थन या विचार है कि बीटा कोशिकाओं नलिकाओं, माना स्थान जहां वयस्क अग्नाशय पूर्वज निवास कर सकते हैं से उत्पन्न किया जा सकता खंडन मिले हैं। इन विवो सीआरई-Lox वंश अनुरेखण विधियों, हालांकि, आत्म नवीकरण और बहु-वंश भेदभाव-दो एक स्टेम सेल को परिभाषित करने के लिए आवश्यक मानदंडों के सवालों का जवाब नहीं कर सकते हैं। इस तकनीकी खाई को संबोधित शुरू करने के लिए, हम अग्नाशय progenitors के लिए 3-आयामी कॉलोनी assays तैयार की। जल्द ही हमारी प्रारंभिक प्रकाशन के बाद, अन्य प्रयोगशालाओं स्वतंत्र रूप से एक समान है, लेकिन समान नहीं, विधि organoid परख बुलाया विकसित की है। organoid परख की तुलना में हमारे विधि को रोजगारmethylcellulose, जो चिपचिपा समाधान है कि कम मात्रा में बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन के शामिल किए जाने की अनुमति देने के रूपों। methylcellulose युक्त assays, आसान पता लगाने और एकल कोशिका के स्तर पर पूर्वज कोशिकाओं है, जो महत्वपूर्ण हैं जब पूर्वज एक छोटे उप जनसंख्या गठन के विश्लेषण की अनुमति के रूप में कई वयस्क स्टेम कोशिकाओं अंग के लिए मामला है। साथ में, कई प्रयोगशालाओं से परिणाम चूहों से अग्नाशय के पूर्वज कोशिकाओं की तरह की इन विट्रो आत्म नवीकरण और बहु-वंश भेदभाव में प्रदर्शित करता है। मौजूदा प्रोटोकॉल दो methylcellulose आधारित कॉलोनी माउस अग्नाशय पूर्वज को चिह्नित करने assays का वर्णन; एक murine बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन की एक वाणिज्यिक तैयारी और अन्य एक कृत्रिम बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन एक laminin हाइड्रोजेल के रूप में जाना होता है। यहाँ दिखाया तकनीक 1) अग्न्याशय की हदबंदी और CD133 ⁺ Sox9 / EGFP की छँटाई वयस्क चूहों से ⁺ नलीपरक कोशिकाओं, 2) एस के एकल कक्ष में गड़बड़ी हैंorted कोशिकाओं, 3) एकल कॉलोनी माध्यमिक कॉलोनी assays में microfluidic QRT- पीसीआर और पूरे माउंट immunostaining, और 4) प्राथमिक कालोनियों के एकल कोशिका निलंबन और फिर से चढ़ाना में हदबंदी का उपयोग कर आत्म नवीकरण या भेदभाव का आकलन करने के लिए विश्लेषण करती है।