De

Primære intestinal organoids er en verdifull modellsystem som har potensial til å betydelig påvirke feltet av slimhinne immunologi. Men kompleksiteten i de organoid vekstegenskaper bære betydelige begrensninger for etterforsker. Spesifikt vekstmønster for hver individuell organoid er svært variabel og skape en heterogen populasjon av epitel-celler i kultur. Med slike betingelser, felles vevskultur praksis, kan ikke bare brukes på organoid systemet på grunn av kompleksiteten av cellestrukturen. Opptelling og Plating basert utelukkende på cellenummer, som er felles for individuelt separerte celler, slik som cellelinjer, er ikke en pålitelig metode for organoids med mindre noe normalisering teknikk er anvendt. Normalisering til totalt proteininnhold er gjort komplekse på grunn av den fastboende proteinmatriks. Disse egenskapene når det gjelder cellenummer, form og celletype bør tas i betraktning ved vurdering av utskilt contelt fra organoid masse. Denne protokollen er blitt generert for å skissere en enkel prosedyre til kultur og behandle tynntarms organoids med mikrobielle patogener og patogen assosiert molekylære mønstre (PAMPs). Det understreker også normaliserings teknikker som skal brukes når protein analyse gjennomføres etter en slik utfordring.