Isolatie en profilering van MicroRNA-bevattende exosomes van Human Bile

Exosome onderzoek in de afgelopen drie jaar sterk uitgebreid de omvang in de richting van identificatie en karakterisering van biomarkers en hun therapeutische toepassingen.

Exosomes onlangs aangetoond microRNA (miRs) bevatten. Mirs zich hebben voorgedaan als waardevolle biomarkers voor diagnostische doeleinden. Zoals specimen collectie in klinieken en ziekenhuizen is erg variabel, miRNA isolatie van hele gal varieert aanzienlijk. Robuuste, nauwkeurige en reproduceerbare miRNA profielen van verzamelde monsters gal te bereiken op een eenvoudige wijze vereist de ontwikkeling van een kwalitatief hoogwaardige protocol te isoleren en te karakteriseren exosomes van gal. De werkwijze vereist verscheidene centrifugeren en een filtratiestap met een laatste stap van ultracentrifugatie om de geïsoleerde exosomes pelleteren. Elektronenmicroscopie, Western blots, stroomcytometrie en multiparameter nanodeeltjes optische analyse, indien beschikbaar, zijn cruciaal karakterisering maatregelen om de kwaliteit van de e validerenxosomes. Voor de isolatie van miRNA uit deze exosomes, spiking het lysaat met een aspecifiek synthetische miRNA van een soort zoals Caenorhabditis elegans, dwz Cel-miR-39, is belangrijk voor normalisatie van RNA extractie-efficiëntie. De isolatie van exosome van galvloeistof volgens deze werkwijze kan de succesvolle miRNA profilering van galmonsters bewaard jarenlang bij -80 ° C.