Abstract
Medicine
מחקר Exosome בשלוש השנים האחרונות הרחיב מאוד את ההיקף לקראת זיהוי ואפיון של סמנים ביולוגיים והשימושים הטיפוליים שלהם.
Exosomes הוכחו לאחרונה להכיל מיקרו-רנ"א (מירס). מירס עצמם שהתעורר כסמנים ביולוגיים חשובים למטרות אבחון. כמו אוסף דגימה הניתנות במרפאות ובבתי חולים משתנה מאוד, בידוד מירנה מן המרה כולו משתנה באופן משמעותי. כדי להשיג פרופילים מירנה חזקים, מדויקים לשחזור ממדגמים מרים שנאספו בצורה פשוטה הנדרש לפיתוח פרוטוקול באיכות גבוהה לבודדים ולאפיין exosomes מן המרה. השיטה מחייבת מספר centrifugations וצעד סינון עם צעד ultracentrifugation סופי כדי גלול exosomes המבודד. מיקרוסקופי אלקטרונים, כתמים מערביים, cytometry זרימה וניתוח אופטי ננו-חלקיקים רב-פרמטר, הדבר אפשרי, הם צעדי אפיון חיוניים כדי לאמת את איכות exosomes. עבור הבידוד של מירנה מן exosomes אלה, תוקע את lysate עם מירנה שאינו ספציפי, סינטטי מזן כמו elegans Caenorhabditis, כלומר, Cel-miR-39, חשובים לנורמליזציה של יעילות מיצוי RNA. בידודו של exosome מנוזל המרה הבא שיטה זו מאפשר מירנה המוצלחת פרופיל ממדגמים מרים מאוחסנים במשך מספר שנים ב -80 מעלות צלזיוס.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved