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Medicine

ヒト胆汁からマイクロRNA含有エキソソームの単離とプロファイリング

Published: June 13th, 2016

DOI:

10.3791/54036

1Division of Gastroenterology and Hepatology, Department of Medicine, Johns Hopkins University School of Medicine, 2Department of Surgery, Tohoku University

最後の3年間のエキソソームの研究は大幅にバイオマーカーとその治療用途の同定および特徴付けに向けて範囲を拡張しました。

エキソソームは、最近、マイクロRNA(のmiR)を含有することが示されています。 MIRS自体は、診断目的のための貴重なバイオマーカーとして生じています。診療所や病院での検体採取が非常に可変であるように、全体の胆汁からのmiRNA分離は、実質的に変化します。簡単な方法で収集され胆汁サンプルから、ロバスト正確で再現性のmiRNAプロファイルを達成するために胆汁からエキソソームを単離し、特徴づけるために、高品質のプロトコルの開発を必要としました。方法は、いくつかの遠心分離および単離されたエキソソームをペレット化し、最終的な超遠心分離ステップで濾過工程を必要とします。電子顕微鏡、ウェスタンブロット、フローサイトメトリーおよびマルチパラメータナノ粒子の光学分析、電子の品質を検証するための重要な特性評価ステップである利用可能xosomes。これらのエキソソームからのmiRNAの単離のために、 線虫(Caenorhabditis elegans)のような種から非特異的、合成miRNAで溶解液をスパイク、 すなわち 、CEL-のmiR-39は、RNA抽出効率の正規化のために重要です。この方法以下の胆汁液からのエキソソームの単離に成功したmiRNAは-80℃で数年間保存胆汁サンプルからプロファイリングできます。

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