Isolasjon og profilering av mikroRNA holdig Exosomes fra Menneskelig Bile

Exosome forskning i de siste tre årene har sterkt utvidet omfang mot identifisering og karakterisering av biomarkører og deres terapeutiske anvendelser.

Exosomes har nylig vist seg å inneholde microRNAs (Mirs). Mirs selv har oppstått som verdifulle biomarkører for diagnostiske formål. Som prøveinnsamling i klinikker og sykehus er ganske variabel, miRNA isolasjon fra hele galle varierer betydelig. For å oppnå robust, nøyaktige og reproduserbare miRNA profiler fra innsamlede galleprøver på en enkel måte krevde utvikling av en høy kvalitet protokoll for å isolere og karakterisere exosomes fra galle. Metoden krever flere sentrifugeringer og et filtreringstrinn med en endelig ultrasentrifuge trinn å pelletere de isolerte exosomes. Elektronmikroskopi, Western blot, flowcytometri og multi-parameter nanopartikkel optiske analyse, der det er tilgjengelig, er avgjørende karakterisering for å validere kvaliteten på exosomes. For isolering av miRNA fra disse exosomes, skyter lysatet med et ikke-spesifikt, syntetisk miRNA fra en art som Caenorhabditis elegans, dvs. Cel-MIR-39, er viktig for normalisering av RNA-ekstraksjon effektivitet. Isolasjon av exosome fra gallevæske følger denne metoden gjør det vellykkede miRNA profilering fra galle prøver lagret i flere år ved -80 ° C.