Microinjection pour transgénèse et Génome Édition dans Épinoche à trois épinoches

Le poisson épinoche à trois épines a émergé comme un système puissant pour étudier la base génétique d'une grande variété de morphologiques, physiologiques et phénotypes comportementaux. Les remarquablement divers phénotypes qui ont évolué comme des populations marines adapter à d'innombrables milieux d'eau douce, combinée avec la capacité de traverser les formes marines et d'eau douce, fournissent un système de vertébrés rares dans lesquels la génétique peuvent être utilisés pour cartographier les régions génomiques contrôlant des traits évolué. Excellentes ressources génomiques sont maintenant disponibles, ce qui facilite la dissection génétique moléculaire de changements évolués. Bien que des expériences de cartographie génèrent des listes de gènes candidats intéressants, les manipulations génétiques fonctionnels sont nécessaires pour tester le rôle de ces gènes. La régulation des gènes peut être étudiée avec des plasmides et des taux d'alcoolémie reporteurs transgénique intégré dans le génome en utilisant le système de transposase Tol2. Fonctions de gènes candidats spécifiques et des éléments cis -Informations règlementaires peuvent être évalués en induisant cibléemutations avec Talen et CRISPR / cas9 réactifs de modification du génome. Toutes les méthodes nécessitent l'introduction d'acides nucléiques dans fécondés embryons d'épinoches une cellule, une tâche rendue difficile par le chorion épais d'embryons d'épinoches et relativement petit et mince blastomère. Ici, un protocole détaillé pour la microinjection d'acides nucléiques dans des embryons d'épinoches est décrit pour transgéniques et d'édition du génome applications pour étudier l'expression et la fonction des gènes, ainsi que des techniques pour évaluer le succès de la transgénèse et de récupérer des lignées stables.