الكشف عن القيامة في فيفو قبل بيوسينسور كاسباسيتراكير

القيامة (اليونانية عن "ارتفاع إلى الحياة") هي ظاهرة انتعاش خلية مكتشفة حديثا حيث تموت الخلايا يمكن عكس العمليات موت الخلية المرحلة المتأخرة التي يفترض عموما أن يكون جوهريا لا رجعة فيه. تعزيز القيامة يمكن في مبدأ الإنقاذ أو الحفاظ على إصابة الخلايا التي يصعب على استبدال مثل كارديوميوسيتيس أو الخلايا العصبية، وبالتالي تيسير استعادة الأنسجة. على العكس من ذلك، قد قمع القيامة في الخلايا السرطانية، تخضع للمبرمج بعد العلاجات المضادة للسرطان، والتأكد من موت الخلايا السرطان وتقليل فرص تكرار. ومع ذلك، أعيقت هذه الدراسات بعدم وجود أدوات لتتبع مصير الخلايا التي يخضع لها القيامة في الحيوانات الحية. يتمثل التحدي في تحديد الخلايا التي قد عكس عملية الإعدام الخلية على الرغم من مظهرها الطبيعي شكلياً بعد الشفاء. وللتغلب على هذه الصعوبة، قمنا بتطوير أنظمة بيوسينسور كاسباسيتراكير الثدييات التي يمكن تحديد وتعقب بشكل دائم أناستاتيك الخلايا في المختبر أو في الجسم الحيو المورفولوجية . نقدم هنا، في فيفو البروتوكولات لتوليد واستخدام نظام كاسباسيتراكير بيوسينسور المزدوج لكشف وتعقب القيامة في melanogaster المورفولوجية بعد التعرض عابر للمحفزات موت الخلية. بينما أجهزة الاستشعار التقليدية والبروتوكولات يمكن تسمية الخلايا تمر بنشاط موت الخلية أبوبتوتيك، بيوسينسور كاسباسيتراكير بشكل دائم يمكن تسمية الخلايا التي انتعشت بعد تفعيل caspase-من السمات مميزة للمرحلة المتأخرة المبرمج، و في الوقت نفسه تحديد العمليات apoptotic النشطة. كما يمكنك تعقب هذا biosensor استعادة الخلايا التي حاول أشكال أخرى من موت الخلايا التي تنطوي على نشاط caspase مباشرة أو غير مباشرة. ولذلك، هذا البروتوكول تمكننا من تتبع مصير هذه الخلايا وذرياتهم، تسهيل الدراسات المستقبلية الوظائف البيولوجية والآليات الجزيئية، الآثار الفسيولوجية والمرضية، والآثار المترتبة على العلاج بشكل مستمر القيامة. نناقش أيضا عناصر التحكم المناسبة لتمييز الخلايا التي يخضع لها القيامة من تلك التي عرضها غير apoptotic caspase النشاط في فيفو.